BJS 202304 果汁中植物源性成分的测定.pdf

BJS 食品补充检验方法 B.JS202304 果汁中植物源性成分的测定 2023-06-13发布 国家市场监督管理总局发布 BJS202304 果汁中植物源性成分的测定 1范围 本方法规定了果汁中黑加仑(Ribes nigrum L.)、蓝莓(Vaccinium spp.)、树莓(Rubus idaeus L.)、 木瓜(Pseudocydonia sinensis L.)、桑甚(Morus alba L.)、椰子(Cocos nucifera L.)、猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)、杏(Prunus armeniaca L.)、山楂(Crataegus spp.)、蔓越莓(Vaccinium macrocarpon Ait)、 芒果(Mangifera indica L.)、梨(Pyrus spp.)、桃(Prunus persica L.)、苹果(Malus pumila Mill.)、葡 萄(Vitis vinifera L.)、草莓(Fragaria ananassa)、橘(Citrus reticulata)、橙(Citrus sinensis)等植物源 性成分鉴定的实时荧光PCR和DNA条形码定性检测方法. 本方法适用于果汁样品标识含有特定植物源性成分的定性检测.其中，实时荧光PCR方法适用于 果汁、果浆以及果肉饮料等样品中黑加仑、蓝莓、树莓、木瓜、桑葚、椰子、猕猴桃、杏、山楂、蔓越莓、芒果、 梨、桃、苹果等单一植物源性成分的定性检测；DNA条形码方法适用于果汁、果浆及果肉饮料等样品中 黑加仑、蓝莓、树莓、木瓜、桑葚、椰子、猕猴桃、杏、山楂、蔓越莓、芒果、梨、桃、苹果、葡萄、草莓、橘、橙等 多种植物源性成分的非靶标测定. 2方法一：实时荧光PCR法 2.1原理 提取试样中基因组DNA 以DNA为模板，利用物种特异性引物及探针进行实时荧光PCR扩增检 测.根据扩增的t值，判定试样中是否含有该源性成分. 2.2试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂.实验用水符合GB/T6682中一级水的要求.试剂 均用无DNA酶污染的容器分装. 2.2.1检测用引物和探针见表1. 表1引物探针序列 目标物种 引物/探针序列(5'→3) 基因来源 F:TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA 内参照 R:AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT 185 rRNA P:FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC-TAMRA F:TGCCCAAGCAGAGCTTCTG 黑加仑 R:CAACCAGGTAGCATTCCTTTGC 18S rRNA P:FAM-TTGGCTCATGCGACGCCCG-BHQ1 F:AGCAACATGACGTCATATATCCACT 蓝莓 R:GAATACAAATTTGTATTGTACCCCA maturase K P:FAM-TGCACTTGCTCATGATCGTGGTTTAAATAGATT-TAMRA 1 BJS202304 表1引物探针序列（续） 目标物种 引物/探针序列(5'→3') 基因来源 F:GTTATTCGTTGGAACCGTAGGAA 树莓 R:GACTGAAAAAACTGCATTTGTGA ndhF P:FAM-ATTATCCAAATTGTTAACCCCGTCCATAAACCT-TAMRA F:AGTGGCTCAATATGGTATTCACTACAGA 木瓜 R:AAAATGTAGATATACCTCCCTTGAGCG ...