ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27517-2011 鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性 与经典毒株复合RT-PCR方法 A multiplex RT-PCR method to differentiate the highly pathogenic and classical porcine reproductive and respiratory syndrome virus 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T27517-2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：河南省动物疫病预防控制中心. 本标准主要起草人：吴志明、闫若潜、张志凌、张健、荆汝顶、刘光辉、赵明军、曹杰伟、钱勇、程俊贞、 赵雪丽、张盼. I GB/T27517-2011 鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性 与经典毒株复合RT-PCR方法 1范围 本标准规定了检测以基因组非结构蛋白Nsp2编码区缺失30个氨基酸为特征的猪繁殖与呼吸综 合征病毒高致病性毒株与非缺失30个氨基酸的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株复合RT-PCR鉴别 诊断方法. 本标准适用于疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染猪血清及临床病料等样品中的病毒核 酸检测. 2试剂和仪器设备 除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯.提取RNA所用试剂均应使用无RNA酶的容器进行 分装. 2.1试剂 2.1.1拭子悬液（见附录A) 组织悬液（见附录A) 以上试剂常温保存. 2.1.2阿氏液（见附录A) 裂解液(TriZol) 1XTAE核酸电泳缓冲液（见附录A) 氯仿，0.01mol/L (PH7.2)的PBS(见附录A) DEPC处理水（见附录A) 以上试剂4C保存. 2.1.3异丙醇，75%乙醇，DNA分子量标准，6×电泳上样缓冲液，以上试剂一20℃保存. 2.1.4阳性对照、阴性对照（见附录A). 2.1.5复合RT-PCR扩增用上、下游引物序列参见附录B. 2.1.6鉴别猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性与经典毒株复合RT-PCR反应体系组成、说明及使用 注意事项参见附录C. 2.2仪器设备 PCR扩增仪，高速冷冻离心机（离心力在12000g以上），核酸电泳仪和水平电泳槽，恒温水浴锅， 2℃~8℃冰箱，一20℃冰箱，单道微量移液器(0.5L~10pL;2uL~20gL;20L~200L;100L~ 1000L) 组织匀浆器或研钵，凝胶成像系统（或紫外透射仪），真空干燥器（非必备）. 3样品的采集、处理、存放及运输 3.1样品采集及处理过程的注意事项 采样过程中样本不得交叉污染，采样及样品处理过程中应戴一次性手套、口罩、帽子. 3.2样品的采集及处理 3.2.1拭子样品 3.2.1.1鼻腔拭子：采样时要将棉拭子深人鼻腔来回刮3~5次，取鼻腔分泌物. 1 ...
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