ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27521—2011 猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法 RT-PCR assay for swine influenza virus nucleic acid 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T27521-2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,中国检验检疫科学研究院,中国兽医药品监 察所. 本标准主要起草人:乔传玲、韩雪清、杨焕良、刘业兵、陈艳、吴绍强、陈化兰、林样梅、辛晓光、朱中武、 王慧煜、刘建、李建、梅琳、王伊琴、徐彪、阮周曦、宁宜宝、薄清如、秦智锋、林志雄. I GB/T27521-2011 猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了猪流感病毒核酸RT-PCR检测方法的技术要求. 本标准规定的RT-PCR检测方法适用于检测猪肺脏组织、鼻腔及气管分泌物和这些采集样品培养 物中的猪流感病毒核酸. 2缩略语 下列缩略语适用于本文件. DEPC:焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate) dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate) EB:溴化乙锭(ethidium bromide) M-MLV RT:莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(moloney murine leukemia virus reverse tran- scriptase) PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction) RNA:核糖核酸(ribonucleic acid) RNAase inhibitor:RNA酶抑制剂 RT-PCR:反转录-聚合酶链式反应(reverse-transcription polymerase chain reaction) SPF:无特定病原体(specific pathogen free) Tag DNA polymerase:Tag DNA聚合酶 3仪器 3.1PCR仪. 3.2台式低温高速离心机. 3.3电泳仪. 3.4电泳槽. 3.5冰箱. 3.6凝胶成像系统. 3.7微量移液器. 3.8水浴锅. 4试剂 4.1 LS TRIzol RNA提取试剂或其他商品化的RNA提取试剂. 4.2氯仿、异丙醇、无水乙醇. 4.31.2%琼脂糖凝胶,见附录A中A.1. 4.450×TAE缓冲液,见附录A中A.2. 1 ...