ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27528—2011 口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法 Real-time RT-PCR for detection of foot and mouth disease virus 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T27528—2011 前言 本标准的附录A、附录B为规范性附录. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院、北京盈九思 科技发展有限公司. 本标准主要起草人：秦智锋、林祥梅、吴绍强、花群义、卢体康、刘建、陈书琨、吕建强、曾少灵、 詹爱军、韩雪清、孙洁、曹琛福、贾广乐、高小博、陈兵、阮周曦、梅琳、张彩虹、陶虹. I GB/T27528—2011 口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法. 本标准适用于口蹄疫病毒的检测与鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T18088出入境动物检疫采样 GB/T18935口蹄疫诊断技术 GB19489实验室生物安全通用要求 SN/T1193基因检验实验室技术要求 3缩略语 下列缩略语适用于本标准. Ct值：循环值(cycle threshold). 4试剂耗材和仪器设备 4.1试剂耗材 4.1.1除非另有说明，在检测中使用的试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T6682的要求. 4.1.2口蹄疫病毒实时荧光RT-PCR试剂：一20℃保存，见附录A. 4.1.3引物和探针序列 上游引物(FMDV-F)序列为：5'ACTGGGTTTTACAAACCTGTGA3'. 下游引物(FMDV-R)序列为：5'GCGAGTCCTGCCACGGA3'. TaqMan探针(FMDV-Pb)序列为：5'TCCTTTGCACGCCGTGGGAC3' 其5'端和3'端分别标记 FAM和BHQ. 4.1.4DEPC处理水：见附录B.推荐购买商品化DEPC处理的无DNA酶和RNA酶的水. 4.1.5氯仿：分析纯，常温保存. 4.1.6异丙醇：分析纯使用前预冷至一20℃. 4.1.775%乙醇：用DEPC水和无水乙醇配制，使用前预冷至一20℃. 4.1.8石英砂：市售化学纯，121℃，15min高压灭菌后备用. 4.1.90.01mol/LPBS pH7.6~7.8:见附录B. 4.1.10阳性对照为灭活疫苗毒或组织培养灭活毒，一20℃保存备用.阴性对照样品可采用健康的猪 或牛的组织材料、 4.2主要仪器设备 4.2.1荧光PCR检测仪. 4.2.2高速台式冷冻离心机：可控温至4℃，离心速度可达12000g以上. 1 ...
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