ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 .GB/T27533-2011 犬细小病毒病诊断技术 Diagnostic techniques for canine parvovirus disease 2011-11-21发布 2012-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T27533—2011 前言 本标准的附录A和附录B为资料性附录. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：青岛农业大学动物科技学院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局. 本标准主要起草人：单虎、温建新、熊炜、黄娟、秦晓冰、于鹏程. GB/T27533—2011 犬细小病毒病诊断技术 1范围 本标准规定了犬细小病毒病的临床检查、血凝与血凝抑制试验、PCR检测的操作方法. 本标准适用于犬细小病毒病的鉴定及其流行病学调查、诊断和监测.其中病毒分离、血凝与血凝抑 制试验、PCR检测适用于犬细小病毒病的病原诊断. 2试剂和材料 2.1FK81细胞（猫肾细胞）. 2.20.9%生理盐水：配制参见附录A中A.1. 2.31%猪红细胞液：配制参见附录A中A.2. 2.4犬细小病毒阳性血清. 2.596孔“v”形微量反应板. 2.6Taq酶及10倍Taq酶反应缓冲液：Taq酶浓度为5U/pL 一20℃保存. 2.71.5 mL Eppendorf管. 2.80.2 mL PCR薄壁管. 2.9dNTP:含dCTP、dGTP、dATP、dTTP各10mmol/L 一20C保存， 2.10引物：浓度为20μmol/L 其序列如下： 上游引物(CPVF):5'GAA TCT GCT ACT CAG CCA CCA AC3'; 下游引物(CPVR):5'GTG CAC TAT AAC CAA CCT CAG C3'. 2.1110%十二烷基硫酸钠：配制参见附录A. 2.12蛋白酶K贮备液：配制参见附录A中A.4. 2.135XTBE电泳缓冲液：配制参见附录A中A.6. 3器材和设备 3.1PCR仪. 3.2高速台式冷冻离心机：可控温至4℃、离心速度可达12000g以上. 3.3水平电泳仪. 3.4凝胶成像系统. 4临床检查 4.1临床特征 4.1.1潜伏期1周到2周，病初无任何症状，食欲减退或废绝，体温40℃以上，粉红色黏稠血样物. 4.1.2病犬先出现呕吐，呕吐出白色泡沫或黄色液体，继而腹泻，粪便稀薄而恶臭，剧烈的腹泻呈喷射 状，粪便呈红色，混有大量黏液或假膜.后期排番茄汁样稀便，并有特殊的腥臭味. 4.1.3患犬迅速消瘦，倦卧不起，目光呆滞，眼窝下陷，腹围紧缩，机体脱水，皮肤干燥、弹性降低. 4.2病理变化 4.2.1心脏肿大呈灰黄色，切面外翻，质地松软，心肌有出血性斑纹. 4.2.2肝脏肿大，包膜紧张，多呈黄褐色，质地松软有局灶性坏死，断面有豆蔻状花纹. 4.2.3胃空虚，黏膜轻度潮红，附有大量黏液；小肠壁增厚，肠管变粗，肠腔狭窄，形成厚层黏膜皱褶，易 1 ...
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