ICS11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27639-2011 结核病病原菌实时荧光PCR检测方法 Real-time PCR method for the detection of tuberculosis pathogenic organisms 2011-12-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 GB/T27639—2011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口. 本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局、华中农业大学、中国检验检疫科学研究 院、北京盈九思科技发展有限公司. 本标准主要起草人：陈茹、刘中勇、杨国海、郭爱珍、曾碧健、韩雪清、高小博、林祥梅、吴晓微. 、 GB/T27639—2011 结核病病原菌实时荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了结核分枝杆菌复合群、结核分枝杆菌、牛分枝杆菌实时荧光PCR检测方法的技术要 求和操作规范. 本标准适用于快速检测细菌培养物、血样、奶样、痰液、组织器官、粪便等临床样品中结核分枝杆菌 复合群、结核分枝杆菌、牛分枝杆菌. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法 GB19489一2008实验室生物安全通用要求 3缩语 下列缩略语适用于本文件. Ct值：荧光信号量达到设定的网值时所经历的循环数. dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核苷三磷酸. DMSO:dimethyl sulfoxide 二甲基亚. EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸. PBS:phosphate buffer solution 磷酸盐缓冲液. PCR:polymerase chain reaction 聚合酶链式反应. Taq酶：Taq DNA聚合酶. UDG酶：uracil DNA glycosylase 尿嗜啶DNA糖基化酶. 4原理 本标准方法采用了TaqMan探针实时荧光PCR技术原理.反应体系中包括一对用于扩增DNA 的引物，和一条能与PCR产物特异杂交的荧光标记探针.探针的5’端标记了被称为报告基团的荧光 素，3’端标记了淬灭基团.在进行PCR延伸反应时，Taq酶的5’外切酶活性将5'端荧光基团从探针上 切割下来，使其与淬灭基团分离，从而仪器能检测到5’端荧光基团所发出的荧光信号，一分子PCR扩 增产物的生成伴随一分子荧光信号的产生.随着扩增循环次数的增加，仪器检测到的荧光信号的累积 反应了扩增产物量的变化. 本标准提供特异检测结核分枝杆菌复合群、结核分枝杆菌和牛分枝杆菌共四套实时荧光PCR检测 方法（见表1）.其中，结核分枝杆菌复合群特异的实时荧光PCR方法分别以IS6110、IS1081插人基因 序列为模板设计特异扩增引物与探针；结核分枝杆菌、牛分枝杆菌特异的实时荧光PCR方法分别以菌 种特异的基因组序列为模板设计特异扩增引物与探针. 1 ...
GB/T 27639-2011 结核病病原菌实时荧光PCR检测方法.pdf
