ICs11.220 B41 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T27644-2011 禽疱疹病毒2型荧光PCR检测方法 Protocol of real-time PCR for detecting Gallid Hepers Virus 2 2011-12-30发布 2012-04-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T27644—2011 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会(SAC/TC181)归口， 本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、扬州大学、河南农业大学， 本标准主要起草人：詹爱军、刘文博、王新卫、卢体康、花群义、陈书琨、秦智锋、陈兵、高小博. I GB/T27644—2011 禽疱疹病毒2型荧光PCR检测方法 1范围 本标准规定了禽疱疹病毒2型荧光PCR检测的操作方法. 本标准适用于禽疱疹病毒2型的鉴定及其流行病学调查、诊断、检疫和监测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件， GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3缩路语 下列缩略语适用于本文件. t值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阅值时所经历的循环数. DNA:deoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸. dNTP:deoxy-ribonucleoside triphosphate三磷酸脱氧核糖核苷.含有dCTP、dGTP、dATP、 dTTP四种脱氧核糖核苷. EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid乙二胺四乙酸. GHV2:Gallid HepersVirus2禽疱疹病毒2型（马立克氏病病毒血清1型）. MD:Marek’s Disease马立克氏病. PBS:phosphate belanced solution磷酸盐缓冲生理盐水. PCR:polymerase chain reaction聚合酶链式反应. Real-time PCR:Real-time polymerase chain reaction实时荧光聚合酶链反应. Taq酶：Thermus aquaticus polymerase耐热DNA聚合酶. 4试剂 4.1试剂级别：除另有规定，本方法试验用水应符合GB/T6682规定的二级水，所用化学试剂均为分 析纯， 4.2禽疱疹病毒2型荧光PCR检测试剂盒，一20℃保存，组成及使用注意事项参见附录A. 4.3引物和探针序列（产物长度142bp) 上游引物：5’CCACCACCTCCCATCTGTAC3’ 下游引物：5’GACAAGGCTGAGCGTAAACC3’ TaqMan探针：5’ACACGGCTCGGTAACAGGACACAATG3’ 其5’端和3’端分别标记FAM 和BHQ(或Tamra或Eclipse) 4.41%肝索钠，配制方法见B.1 4℃保存. 4.5三氢甲烷，常温保存. 1 ...
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