KJ 食品快速检测方法 KJ 202309 蔬菜水果中甲基异柳磷的快速检测 胶体金免疫层析法 2023-06-13发布 国家市场监督管理总局 发布 KJ202309 蔬菜水果中甲基异柳磷的快速检测 胶体金免疫层析法 1范围 本方法规定了蔬菜水果中甲基异柳磷的胶体金免疫层析快速检测方法. 本方法适用于豆类、叶菜类、薯芋类、仁果类等蔬菜水果中甲基异柳磷的快速定性测定. 2原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理.样品中的甲基异柳磷经提取后与胶体金标记的特异性抗体结 合，抑制抗体和检测线(T线)上抗原的结合，从而导致检测线(T线)颜色深浅的变化.通过检测线(T 线)与控制线(C线)颜色深浅比较，对样品中甲基异柳磷进行定性判定. 3试剂与材料 本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水. 3.1试剂 3.1.1丙酮(C3HO). 3.1.2氯化钠(NaC1). 3.1.3十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O). 3.1.4二水合磷酸二氢钠(NaH2PO2H2O). 3.2试剂配制 样品提取液(0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液)：准确称取9g氯化钠(3.1.2)、6g十二水合磷酸氢二钠 (3.1.3)、0.4g二水合磷酸二氢钠(3.1.4)，用水溶解并定容至200mL. 3.3标准品 甲基异柳磷(C1H2NOPS CAS号：99675-03-3)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书 的标准物质. 3.4标准溶液配制 3.4.1甲基异柳磷标准储备液(100μg/mL):准确称取甲基异柳磷标准品(3.3)10mg 用丙酮(3.1.1)溶 解后，全部转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，制成质量浓度为100ug/mL的标准储备液. 一18℃及以下避光保存，有效期6个月. 3.4.2甲基异柳磷标准工作液(1μg/mL):准确移取甲基异柳磷标准储备液(3.4.1)100uL置于10mL 容量瓶中，用丙酮(3.1.1)稀释，定容至刻度，摇匀，制成质量浓度为1g/mL的标准工作液.一18℃及 以下避光保存，临用现配. 3.4.3标准溶液为外部获取时，管理及使用应符合相关规定. 1 KJ202309 3.5材料 甲基异柳磷胶体金免疫层析试剂盒：一般包含金标微孔、试纸条等. 4仪器和设备 4.1电子天平：感量分别为0.0001g和0.1g. 4.2移液器：200uL、1mL和10mL. 4.3捣碎机. 4.4离心机：转速≥4000r/min(可选). 4.5涡旋振荡器. 4.6孵育器. 4.7胶体金读数仪（可选）. 5环境条件 温度10℃~30℃. 6分析步骤 6.1试样制备 取约10g具有代表性的样品，搅碎至匀浆状，分别装入洁净容器作为试样和留样，密封，标记.留 样置于一18℃及以下保存. 6.2试样提取 6.2.1蔬菜（除甘薯外）、水果 准确称取均质混匀的试样2g(精确至0.1g)于15mL.离心管，加入8mL样品提取液(3.2)，涡旋或 剧烈振荡2min 静置分层或4000r/min离心2min 上清液即为待测液. 6.2.2甘薯 准确称取均质混匀的试样1g(精确至0.1g)于15mL离心管，加入10mL样品提取液(3.2)，涡旋 或剧烈振荡2min 静置分层或4000r/min离心2min 上清液即为待测液. 6.3测定步骤 6.3.1蔬菜（除甘薯外）、水果 吸取待测液(6.2.1)200μL于金标微孔中，上下抽吸5次~10次，直至微孔试剂混合均匀.室温温 育3min 将试纸条插入到金标微孔中，反应6min后，从微孔中取出试纸条...
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