ICS65.020 B61 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1743-2009 食用菌菌种真实性鉴定RAPD法 Verification of genuineness for edible mushroom spawn--RAPD 2009-04-23发布 2009-05-20实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T1743-2009 食用菌菌种真实性鉴定RAPD法 1范围 本标准规定了利用RAPD技术鉴定食用菌菌种真实性的方法. 本标准适用于糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus.)、白黄侧耳(Pleurotus cornucopiae)、肺形侧耳(Pleu- rotus pulmonarius)、佛州侧耳(Pleurotus floridanus)、杏鲍菇(Pleurotus eryngi)、白灵菇(Pleurotus nebrodensis.)、香菇(Lentinula edodes.)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、黑木耳(Auricularia auricula)、 茶树菇(Agrocybe cylindrica)、鸡腿菇(Coprinus atus.)、金针菇(Flammulina velutipes)、灰树花 (Grifola frondosa)等食用菌菌种真实性的鉴定，包括母种（一级种）、原种（二级种）和栽培种（三级 种). 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 NY/T1097一2006食用菌菌种真实性鉴定酯酶同工酶电泳法 3原理 RAPD方法是以一系列不同的随机排列的寡聚核苷酸单链（通常为十聚体）为引物，对所研究的基 因组DNA进行PCR扩增，RAPD所用的一系列引物的DNA序列各不相同，但对于任一特定引物，它 同基因组DNA序列有其特定的结合位点.这些特定的结合位点在基因组某些区域内的分布如符合 PCR扩增的反应条件，即在一定范围内模板DNA上有与引物互补的反相重复序列时，就可扩增出此范 围内的DNA片段.不同物种基因组DNA中的这种反相重复序列的数目和间隔的长短不同，就可导致 这些特定结合位点分布发生相应的变化，而使PCR产物增加、减少或发生分子量的改变.通过对PCR 产物的检测和比较，即可识别这些物种基因组DNA的多态片段. 4试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂，水为GB/T6682规定的二级水. 4.170%乙醇溶液：见附录A.1. 4.21mol/L Tris-HCl(pH8.0):见附录A.2. 4.30.5mol/L乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)溶液：见附录A.3. 4.4CTAB提取缓冲液：见附录A.4. 4.5TE缓冲液：见附录A.5. 4.650×TAE缓冲液：见附录A6. 4.7加样缓冲液：见附录A.7. 4.8核酸染料：按使用说明操作. 4.9苯酚一三氯甲烷一异戊醇溶液=25十241. 4.10三氯甲烷一异戊醇溶液=241. 1 NY/T 1743—2009 4.11 无水乙醇 4.12四种脱氧核糖核苷酸(dATP、dCTP、dGTP、dTTP)混合溶液. 4.13 Tag DNA聚合酶. 4.1410XPCR反应缓冲液（含MgCl2). 4.15引物：参见附...
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