ICS11.220 B41 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1953-2010 猪附红细胞体病诊断技术规范 Diagnostic technique for Mycoplasma suis(Eperythrozoon suis) 2010-09-21发布 2010-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T1953-2010 猪附红细胞体病诊断技术规范 1范围 本标准规定了猪附红细胞体病诊断技术. 本标准适用于对猪附红细胞体病的诊断， 2诊断方法 2.1猪附红细胞体病的临床诊断 2.1.1流行病学特点 猪附红细胞体除感染猪外，还可感染人及绵羊、牛、鼠、猫等多种动物，为人畜共患病原体.发病猪 和隐性感染猪是本病的传染源.不同年龄、性别、品种的猪均易感.本病一年四季均可发生，尤其是夏、 秋季节.主要通过吸血昆虫传播，或通过血液污染的针头和器械传播，也可垂直传播. 2.1.2临床症状指标 2.1.2.1发热，体温升高到40℃~42℃，食欲下降，精神委顿，呼吸困难，排棕红色尿液. 2.1.2.2感染初期皮肤潮红，后期背部及四肢末梢发绀，特别是耳廓边缘发绀. 2.1.2.3贫血，全身皮肤及可视黏膜苍白或黄染. 2.1.2.4慢性病猪表现消瘦、苍白，部分猪出现莓麻疹或病斑型皮肤变态反应. 2.1.2.5血液稀薄，凝固不良，红细胞数量减少. 2.1.2.6母猪繁殖障碍. 2.1.3病理变化指标 2.1.3.1全身肌肉色泽变淡，脂肪及肺、胸腔、胃、肠、膀胱等内脏器官浆膜有不同程度的黄染. 2.1.3.2淋巴结、脾脏、肝脏肿大；肾脏肿大，质地变脆，外观黄染. 2.1.3.3膀胱蓄积棕红色尿液，黏膜黄染. 2.2猪附红细胞体的涂片染色镜检 2.2.1直接涂片镜检 自耳静脉或前腔静脉无菌采血，将采集的新鲜血样加等量的生理盐水稀释后，吸取一滴置载玻片 上，加盖玻片，置400倍(10×40)光学显微镜下观察.猪附红细胞体感染猪可见红细胞发生形态学变 化，呈锯齿状、菜花状或星芒状等；健康猪红细胞形态规则. 2.2.2涂片染色镜检 无菌自耳静脉或前腔静脉采血后抹片，经甲醇固定3min~5min并干燥后，浸入盛有姬姆萨染色液 (见附录A)的染色缸中染色30min 取出水洗，洗干水分，置400倍(10×40)光学显微镜下观察.猪附 红细胞体感染猪红细胞呈波浪状、星芒状、锯齿状改变，且周围有染成紫红色的小体（图1A);健康猪红 细胞形态规则，边缘光滑，染色均匀（图1B). 2.3猪附红细胞体的PCR检测 2.3.1试剂和材料 除另有规定外，所用生化试剂均为分析纯. 2.3.1.1TE缓冲液（见附录A)、20%SDS、5%CTAB(十六烷基三甲基溴化铵），以上试剂常温保存. 2.3.1.210mg/mL溶菌酶、5moi/LNaC1、Tris饱和酚/氯仿/异戊醇(25：24：1)、0.1%肝素、1×核 1 NY/T1953-2010 图1猪血液涂片，姬姆萨染色(400×) 酸电泳缓冲液（见附录A) 以上试剂4℃保存. 2.3.1.320mg/mL蛋白酶K 异丙醇，75%乙醇，DNA分子量标准，6X电泳上样缓冲液，以上试剂 一20℃保存. 2.3.1.4阳性对照、阴性对照（见附录A). 2.3.1.5PCR扩增用上、下游引物序列见附录B. 2.3.1.6猪附红细胞体PCR诊断反应体系组成、说明及使用注意事项见附录C. 2.3.2仪器设备 PCR扩增仪，高速冷冻离心机（离心力在12000Xg以上），核酸电泳仪和水平电泳槽，恒温水浴锅， 2℃~8℃冰箱，-20℃冰箱，单道微...
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