ICS 65.02fJ B15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2050—2011 玉米霜霉病菌检疫检测与鉴定方法 Detection and identification of Peronosclerospora spp. 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2050—2011 前言 本标准按照GB/T1.1——2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出. 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)归口. 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、广西壮族自治区植保总站. 本标准主要起草人：王福祥、王凯学、覃贵亮、吴志红、邓铁军、李潇楠、李菁、沈昆、朱莉. I NY/T2050—2011 玉米霜霉病菌检疫检测与鉴定方法 1范围 本标准规定了玉米霜霉病菌的现场检验及室内鉴定的方法. 本标准适用于玉米、甘蔗、高粱等禾本科植物上玉米霜霉病菌的检疫检测与鉴定. 2原理 玉米霜霉病主要由玉蜀黍霜指霉(Peronosclerospora maydis)、高梁霜指霉(Psorghi)、菲律宾霜 指霉(P.philippinensis)和甘蔗霜指霉(P.sacchari)引起，该类菌（以下简称玉米霜霉病菌Peronoscle- rospora spp.)属于卵菌纲(Oomycetes) 指梗霉目(Sclerosporales) 指梗霉科(Sclerosporaceae) 霜指霉属 (Peronosclerospora).该病菌都是专性寄生在禾本科植物上（参见附录A) 可侵染玉米的叶片和茎秆造成 系统和局部症状.这4种病菌引起的玉米霜霉病有明显的症状，病原菌有其独特的形态特征，用特异引 物对病菌DNA进行PCR扩增时可获得特异的DNA片段.病害的症状、病原菌的形态特性以及PCR特 异反应特征是鉴定玉米霜霉病菌的主要依据. 3试剂与材料 棉蓝乳酚油、吐温-20、乙醇、11.5%NaOH、0.015%Trypane Blue、乳酸、甘油、10倍PCR缓冲液、 玉米霜霉病菌DNA的特异性引物、dNTP、Taq酶、5倍TBE电泳缓冲液、琼脂糖凝胶(0.8%)、吸水纸、 无菌水、蒸馏水，10O0 bp DNA ladder等. 4仪器及用具 盖玻片、载玻片、生物显微镜、高速台式离心机、P℃R扩增仪、天平、高压灭菌锅、恒温培养箱、水平 电泳仪、凝胶成像系统、PCR反应管、微量移液器、移液器、解剖刀、培养皿、烧杯、漏斗、镊子、分 样筛(5mm、4mm、3mm)、吸管等. 5现场检测 5.1产地检测 在寄主大田作物生长期逐行进行田间症状目测踏查.按要求采集有典型症状和疑似症状的玉米霜霉 病样本进行室内检验鉴定.玉米霜霉病典型症状参见附录B. 5.2调运检测 现场核实货物有关单证，核实产地.重点检查来自玉米霜霉病菌发生区的其寄主种子或原粮中是 否夹带玉米、高粱、甘蔗等叶片病残体，是否夹带颖壳的高粱种子；带玉米、高梁植株残体的包装、铺垫材 料，以及甘蔗插条和其他玉米霜霉病菌寄主种苗叶片是否有可疑病斑，将检获物带回实验室作进一步检 验. 6室内检测 6.1寄主叶片等病残体检测 6.1.1直接镜检检测 如果寄主叶片上有白色霜霉状物，可直接挑取白色霜霉或撕取带有白色霜霉的病组织制成玻片样 品在显微镜下观察病原菌的孢囊梗和孢子囊形态.如果染色观察，加1滴棉蓝乳酚油染色后立即用无 1 ...
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