ICS65.020 B15 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2059—2011 灰飞虱携带水稻条纹病毒检测技术 免疫斑点法 Technical specification for the detection of rice stripe virus in small brown planthopper-Dot immunobinding assay 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T20592011 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口. 本标准起草单位：江苏省农业科学院植物保护研究所. 本标准主要起草人：周益军、周彤、范永坚、程兆榜. I NY/T2059—2011 灰飞虱携带水稻条纹病毒检测技术免疫斑点法 1范围 本标准规定了灰飞虱携带水稻条纹免疫斑点检测方法. 本标准适用于灰飞虱携带水稻条纹病毒的检测. 2原理 硝酸纤维素膜在中性条件下有效地吸附生物大分子，将抗原吸附于硝酸纤维素膜后，进行抗原抗体 反应，当抗体与膜上的抗原结合后，通过再次结合有标记的抗抗体，经底物作用使斑点着色. 3试剂 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为蒸馏水. 3.1碳酸钠(Na2CO3) 3.2碳酸氢钠(NaHCO3) 3.3氯化钠(NaCI) 3.4氯化钾(KCI) 3.5磷酸二氢钾(KH2PO4) 3.6磷酸氧二钠(Na2HPO4) 3.7盐酸(HCI) 3.8无水乙醇(EaOH) 3.9过氧化氢(H202) 3.104-氯-1-萘酚 3.11吐温20(Tween-20) 3.12脱脂奶粉 3.13小牛血清蛋白(BSA) 3.14辣根过氧化物酶 3.15磷酸盐缓冲液(0.02mol/L):准确称取40.00g氯化钠(3.3)、1.00g氯化钾(3.4)、1.00g磷酸二 氢钾(3.5)和15.00g磷酸氢二钠(3.6)于2500mL的容量瓶中加水定容至刻度，用盐酸(3.7)调节pH 至7.5 4℃保存： 3.16磷酸盐吐温20缓冲液(0.01mol/L):准确称取40.00g氯化钠(3.3)，1.00g氯化钾(3.4)、 1.00g磷酸二氢钾(3.5)和15.00915.00g磷酸氢二钠(3.6)于5000L的容量瓶中加水定容至刻度， 用盐酸(3.7)调节pH至7.5，再加入2.5mL吐温20(3.11)，4℃保存. 3.17包被缓冲液(0.05mol/L):准确称取1.59g碳酸钠(3.1)和2.93g碳酸氢钠(3.2)于1000mL 的容量瓶中加水定容至刻度，用盐酸(3.7)调节pH至9.6 4℃保存. 3.181%脱脂奶粉封闭液：准确称取1.00g脱脂奶粉(3.12)加入100L磷酸盐吐温20缓冲液 (3.16) 混匀后4℃保存. 3.192%小牛血清蛋白封闭液：准确称取0.2g小牛血清蛋白(3.13)加入100L磷酸盐吐温20缓冲 液(3.16)，混匀后4℃保存. 1 ...
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