ICS67.100.01 X16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2069-2011 牛乳中孕酮含量的测定 高效液 相色谱一质谱法 Determination of progesterone in milk by HPLC-MS 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2069-2011 牛乳中孕酮含量的测定高效液相色谱一质谱法 1范围 本标准规定了牛乳中孕酮含量的高效液相色谱一质谱测定方法. 本标准适用于牛乳中孕酮含量的测定. 本标准的方法检出限为1g/kg. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试料经甲醇溶液提取后，经8萃取柱净化，经电喷雾离子源高效液相色谱一质谱测定，保留时间和 选择离子丰度比定性，外标法定量. 4试剂和材料 除特殊注明外，本方法仅使用确认为分析纯的试剂.水应为GB/T6682一级用水. 4.1乙腈：色谱纯. 4.2甲醇. 4.3乙酸铵溶液[c(CH3 COONH4)=3mmol/L]:称取0.231g乙酸铵于1000mL容量瓶中，定容，过 0.45μm水相滤膜. 4.4乙酸铅溶液：称取20g乙酸铅三水合物[Pb(CH COO)z3H2O] 溶解于100mL的水中，配成质 量分数为20%的乙酸铅溶液. 4.5标准溶液 4.5.1孕酮标准贮备液：质量浓度为100μg/mL. 准确称取0.010g(精确到0.0001g)孕酮（纯度≥98%），用甲醇(4.2)溶解并定容至100mL.于 0℃~一4℃贮存，贮存期三个月. 4.5.2孕酮标准使用液 根据工作需要，用甲醇对标准贮备液(4.5.1)进行稀释.于0℃~4℃贮存.贮存期一个月. 5仪器设备 5.1高效液相色谱一质谱联用仪：配有电喷雾离子源和四级杆质量分析器. 5.2高速离心机：10000r/min 5.3超声波发生器. 5.4涡旋震荡仪. 5.5分析天平：感量为0.0001g. 5.6天平：感量为0.001g. 5.7Cs固相萃取柱：500mg 6mLo NY/T2069-2011 5.8滤膜：孔径0.45um. 6测定步骤 6.1样品提取 准确称取5g试料（精确至0.001g) 置于50mL离心管中，加入15mL甲醇(4.2）和1mL乙酸铅 溶液(4.4)，涡旋30s 超声提取10min I0000r/min离心10min.取上清液于25mL容量瓶，残渣再加 入5mL甲醇(4.2)，涡旋30s 超声提取10min 10000r/min离心10min.合并上清液，用甲醇(4.2)定 容，得到甲醇提取液. 6.2样品净化 取C萃取柱进行活化处理，加入5mL甲醇(4.2)，近流干时，加入5L水淋洗，抽至水面刚达到 填料表面.取5.00mL甲醇(4.2)提取液，加人5mL水混合后，倾入C萃取柱（流速为1mL/min) 用 5mL水淋洗，抽干后，用乙腈(4.1)洗脱，定容至2.00mL.洗脱液过0.45um滤膜，供高效液相色谱一 质谱联用仪测定. 6.3基质标准曲线的制备 应用本标准方法进行牛乳中孕酮含量的检测，获得总离子流图和质谱谱图.试样总离子流图在孕 酮标准总离子流图对应的保留时间士5%范围内中无色谱峰，且该范围内无孕酮特征离子，则该牛乳为 基质试样. 称取5g(精确至0.001g)基质试样6份，分别准确移取标准使用液(4.5....
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