ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2288-2012 黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫检测 与鉴定方法 Detection and identification of Cucumber green mottle mosaic virus 2012-12-24发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2288-2012 黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫检测与鉴定方法 1范围 本标准规定了农业植物检疫中黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫检测及鉴定方法. 本标准适用于黄瓜绿斑驳花叶病毒的检检宝 2规范性引用文件 下列文件对于本文件 注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引 GB15569农业 MNG 3原理 黄瓜绿斑病 R星 病毒属随嫁接 穗、砧木和种子 W 也最终腐烂变味. 其病原形态、特性 PCR反应结 果(RT-PCF 核 4试剂与材 赣ARC 碳酸钠( 孟氟化 2H)、无水磷酸 二氢钾(KH2 钢(N)氢氧化钠 (NaOH)、乙 PO 无水、市售抗体、 市售酶标抗体 见录A. 试剂量 5仪器及用具 1N 台式离心机、分 度必 、水浴锅、电泳仪及 水平电泳槽、培养箱、 6取样方法 6.1种子样品 取样数量与方法按GB15569的规 6.2植株或果实样品 随机选取发病叶片或果实，以幼嫩叶片和果实为主.每份样品数量不少于200g 装人自封袋中密 封低温保存，并注明采集时间、地点、采集人等信息. 7检疫鉴定 7.1症状检验 在瓜类作物生长期，选择有代表性的地块，检查叶片、果梗、果实，与黄瓜绿斑驳花叶病毒的典型症 状进行比较，参见附录B. 7.2快速诊断检验 1 NY/T2288—2012 快速诊断试纸条或诊断试剂盒检测法参见附录.如采用市售的试剂盒，按说明操作. 7.3酶联免疫吸附测定法 黄瓜绿斑驳花叶病毒酶联免疫吸附测定法参见附录D.如采用市售的试剂盒，按说明操作. 7.4RT-PCR检测法 黄瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCR检测法参见附录E.如采用市售的试剂盒，按说明操作. 8结果判定和报告 8.1结果判定 8.1.1典型症状判定 西瓜果实发病且符合典型症状的可直接判定，必要时做其他检测. 8.1.2快速诊断试纸条或诊断试剂盒结果判定 按产品使用说明进行判定. 8.1.3酶联免疫吸附测定法结果判定 在阴性对照OD值≤0.1，且阳性对照OD值大于阴性对照OD值2倍的前提下，样品孔OD值大于 阴性对照O值2倍时，判定为阳性反应，即样品带黄瓜绿斑驳花叶病毒，否则判定为阴性反应，即样品 不带黄瓜绿斑驳花叶病毒. 8.1.4RT-PCR检测法结果判定 观察电泳结果，在阳性对照在500bP处有条带出现，且阴性对照无条带出现的前提下，待测样品在 500bp处有条带出现，判断样品携带黄瓜绿斑驳花叶病毒、否则判定为阴性反应，即样品不带黄瓜绿斑 驳花叶病毒. 8.2结果报告 将实验室检验鉴定结果填入《植物有害生物样本鉴定报告》（见附录F). 9除害处理 检验过程中使用的有关材料料和用具，在使用完毕后须进行消毒和除害处理.经检疫鉴定后的种 子样品应保存在4℃冰箱内，叶片和果实样品应保存在一20℃以下或冻干保存三个月备查，保存期满 后，进行灭活处理. 2 ...
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