ICS67.120.30 B50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T7210-2011 鱼类简单异尖线虫幼虫检测方法 Method for detection of Anisakis simplex larva in fish 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 SC/T7210-2011 鱼类简单异尖线虫幼虫检测方法 1范围 本标准规定了简单异尖线虫(Anisakis simplex)幼虫形态学鉴定和聚合酶链式反应(PCR)检测方 法. 本标准适用于鱼类简单异尖线虫幼虫的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(eqv ISO3696:1987) GB/T18088出入境动物检疫采样 3试剂和溶液 除另有说明外，试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T6682中一级水的指标. 3.1生理盐水：0.85g氯化钠溶于100mL蒸馏水中，室温保存. 3.2巴氏液：0.85g氯化钠和3mL甲醛溶液溶于97mL蒸馏水中，室温保存. 3.310%的甘油酒精：10mL甘油溶于90mL70%的酒精中，室温保存. 3.4乙醇：70%、80%的乙醇以及无水乙醇. 3.5乳酸酚透明液：按甘油：苯酚：乳酸：蒸馏水的体积比2：1：1：1的比例配置，室温保存. 3.6TE:10mmol/L Tris-C1(pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0) 在1.05kg/cm2高压下蒸汽灭菌 20min 于4℃贮存. 3.710%SDS溶液：10gSDS溶于90mL蒸馏水中，68℃助溶，调PH至7.2，最后加水定容至 100mL 室温保存. 3.8抽提缓冲液I:400uLTE、16uL蛋白酶K(5mg/mL)和20μL10%SDS的混合溶液. 3.9抽提缓冲液Ⅱ：按Tis溶液饱和过的重蒸酚：氯仿：异戊醇以25；24：1的比例混合，密闭避光 4℃保存. 3.10 MgCle:25.0 mmol/L. 3.11TAE缓冲溶液：按Tris碱4.84g、冰乙酸1.142mL和Na2EDTA2H2O0.744mL加水定容到 1000mL 3.121.0%琼脂糖：琼脂糖1g溶于100 mL TAE中. 3.13Taq酶：一20℃保存，避免反复冻融. 3.14蛋白酶K:一20℃保存，避免反复冻融. 3.15 dNTPs:含dATP、dTTP、dGTP和dCTP各10mmol/L 3.1610 XPCR buffer:500.0mmol/LpH8.8的Tris-HCl、500.0mmol/L的KCl和1%的TritonX- 100混合溶液. 3.17矿物油：要求无DNA酶和RNA酶，用于无热盖的PCR扩增仪. 3.18分子量标准：推荐使用DL2000 marker 4℃保存；长期贮存应分装置于一20℃，避免反复冻融. 1 SC/T7210—2011 3.19溴酚蓝指示剂溶液：溴酚蓝100mg 双蒸水5mL 室温下过夜.待溶解后再称取蔗糖25g 加双 蒸水溶解后与溴酚蓝溶液混合，摇匀后定容至50mL 加入NaOH调至蓝色. 4仪器和设备 4.1电子天平. 4.2剪刀、镊子、昆虫针和手术刀. 4.3体视显微镜及普通光学显微镜. 4.4酒精灯. 4.5培养皿. 4.6普通台式离心机和高速冷冻离心机. 4.7普通冰箱和超低温冰箱. 4.8微量移液器和Tip...
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