ICS65.150 B52 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T7213-2011 嗜麦芽寡养单胞菌检测方法 Detection methods for stenotrophomonas maltophilia from chanel fish 2011-09-01发布 2011-12-01实施 中华人民共和国农业部发布 SC/T7213-2011 嗜麦芽寡养单胞菌检测方法 1范围 本标准规定了由嗜麦芽寡养单胞菌(stenotrophomonas maltophilia)引起的细菌性病害的病原鉴 定方法与结果判定. 本标准适用于斑点叉尾(Ictalurus punctatus)和云斑细(Ictalurus nebulosus)分离的嗜麦芽寡养 单胞菌的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法 GB/T4789.28一2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂 GB/T18652一2002致病性嗜水气单胞菌检验方法 SC/T7014一2006水生动物检疫实验技术规范 3试剂、染色液与培养基 检验中所需试剂、染色液与培养基的配制按GB/T4789.28、GB/T18652或SC/T7014执行；聚 合酶链式反应(PCR)测定用水应符合GB/T6682中一级水的规格，且要用焦炭酸二乙酯(DEPC)处理 水(A.1) 上述未提及的见附录A. 16 S rRNA序列扩增引物，P1:5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3' P2:5'-GGTTACCTT- GTTACGACTT-3' 一20℃保存. 4设备和器械 超净工作台、生物显微镜、P℃R仪、电泳仪、微生物检测必备辅助设备和器械等. 5细菌分离与培养 5.1取样 取鱼的肝、肾及病灶组织. 从取样组织中直接分离接种；在无菌环境中将样品置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗并捣碎，然 后分离接种. 5.2分离培养 样品接种在血液琼脂平板（按GB/T4789.28一2003中4.6规定的方法配制），按常规法划线. 28℃培养24h~48h.然后，从中挑取黄、灰或淡黄色的单菌落在普通营养琼脂平板（按GB/T 4789.28一2003中4.7规定的方法配制)进行纯化培养. 6革兰氏染色 按GB/T4789.28一2003中2.2的规定执行. 1 SC/T7213-2011 7生理生化试验 7.1葡萄糖氧化发酵试验(0/F试验) 按GB/T4789.28一2003中3.1的规定执行.若封口管与开口管的培养基均变黄色，为发酵型细 菌，判断为阳性；否则为非发酵型菌，判断为阴性. 7.2葡萄糖酸盐试验 将待检菌接种于1%葡萄糖酸盐液体培养基中（配制方法见A.2、A.3) 置28℃静置培养24h 加入 裴林试剂0.5m(配制方法见A.4) 于100℃水浴10min后迅速冷却，待观察.试管液体出现黄绿色、 绿橙色或红色沉淀为阳性，不变色（仍为蓝色）为阴性. 7.3肌醇发酵试验 将待检菌穿刺接种于肌醇发酵试验培养基（配制方法见A.5) 28℃培养，分别在24h、72h、120h 时观察.培养基变黄色为阳性，不变黄色为阴性. 7.4硫化氢(H2S)试验 按GB/T4789.28一2003中3.14的规定执行.培养基变黑色为阳性，不变黑色为阴性. 7.5吲哚试验 按SC/T7014一2006中表2的哚（靛基质）试验的规定执行....
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