GB 中华人民共和国国家标准 GB31610.1-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中颚口线虫的检验 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB31610.1-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中颚口线虫的检验 1范围 本标准规定了动物性水产品及其制品中口线虫(gnathostoma)幼虫的形态学和PCR检验方法. 本标准适用于动物性水产品及其制品中颚口线虫幼虫的检验. 2原理 动物性水产品及其制品中的颗口线虫幼虫主要寄生于淡水鱼类、两栖类等水产品的肌肉等组织内. 用胃蛋白酶消化动物宿主组织获得虫体.根据幼虫的形态特征，判断颚口线虫属幼虫.对可疑虫体通 过扩增颚口线虫线粒体细胞色素C氧化酶第1亚基(Cox1)基因片段并测序，进行常见颗口线虫幼虫的 鉴定. 3仪器和设备 3.1生物显微镜：100×~400×. 3.2体视显微镜：7.5×~150×. 3.3PCR扩增仪. 3.4凝胶成像系统. 3.5电泳仪. 3.6恒温培养箱：37℃士1℃. 3.7磁力搅拌器. 3.8高速离心机：转速≥12000r/min. 3.9网筛：孔径2mm(10目). 3.10锥形量杯：1000mL. 3.11微量移液器0.2L~2.5pL、1L~10L、10L~100L、100L~1000L. 4试剂和材料 4.1试剂 4.1.1盐酸：36%~38%HCl溶液. 4.1.2生理盐水：0.85%NaCl溶液. 4.1.31mol/L.Tris-HCl溶液(pH8.0). 4.1.40.5mol/L EDTA溶液(pH8.0). 4.1.510%SDS溶液. 4.1.65mol/L NaCI溶液. 4.1.73000U/mg胃蛋白酶. GB31610.1-2023 4.1.820mg/mL蛋白酶K. 4.1.9苯酚/三氯甲烷/异戊醇(25：24：1). 4.1.105U/uL耐热DNA聚合酶. 4.1.1110XPCR缓冲液. 4.1.12 25 mmol/L MgCl2. 4.1.13 dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP 每种浓度为2.5mmol/L. 4.1.14琼脂糖：电泳级. 4.1.1550XTAE缓冲液，使用前用去离子水稀释成1×TAE缓冲液. 4.1.161XTE溶液(pH8.0). 4.1.1710mg/mL溴化乙锭(EB)或其他核酸染料. 4.1.186×上样缓冲液. 4.1.19100bp~2000 bp DNA分子量标准. 4.1.20引物：浓度为10μmol/L. 正向引物FH5:5'-TTTTTTGGGCATCCTGAGGTTTA-3 反向引物MCO1B:5'-TAAAGAAAGAACATAATGAAAATGAGC-3' 扩增颗口线虫coxr1基因片段长度为441bp. 4.2试剂配制 4.2.1生理盐水：称取8.5gNaC1溶解于900mL去离子水，再加去离子水至1000mL. 4.2.21mol/L Tris-HCl溶液：称取121.1 g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解于800mL去离子水，用盐 酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL. 4.2.30.5mol/L EDTA溶液：称取186.1gNa2EDTA2H2O(二水合乙二胺四乙酸二钠)溶解于 800mL去离子水，搅拌溶解，用NaOH调节pH至8.0，加去离子水至1000mL. 4.2.45mol/LNaC1溶液：称取292.5gNaC1溶解于900mL去离子水...
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