GB 31610.5-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中并殖吸虫的检验.pdf

GB 中华人民共和国国家标准 GB31610.5—2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中并殖吸虫的检验 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB31610.5-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中并殖吸虫的检验 1范围 本标准规定了动物性水产品及其制品中并殖吸虫(Paragonimus)囊蚴的形态学和PCR的检验 方法. 本标准适用于动物性水产品及其制品中并殖吸虫囊呦的检验. 2原理 动物性水产品及其制品中并殖吸虫的囊蚴主要寄生在蟹类、喇蛄和沼虾等甲壳动物的肌肉组织内. 捣碎沉淀分离或捣碎后使用胃蛋白酶消化动物宿主组织获得囊蚴，根据并殖吸虫囊蚴的形态特征，初步 判断囊蚴的种类；通过扩增并殖吸虫核糖体DNA的第二内转录间隔区(ITS2)基因片段并测序，进行并 殖吸虫囊呦的鉴定. 3仪器与设备 3.1生物显微镜：100×~400×. 3.2体视显微镜：7.5×~150×. 3.3PCR扩增仪. 3.4凝胶成像系统. 3.5电泳仪. 3.6恒温培养箱：37℃士1℃. 3.7高速离心机：转速≥12000r/min. 3.8网筛：孔径2mm(10目)；孔径0.425mm(40目). 3.9微量移液器：0.2L~2.5gL、1gL~10gL、10L~100L、100gL~1000gL. 3.10锥形量杯：1000mL. 3.11玻璃珠：425m~600μm. 3.12陶瓷研钵（直径16cm)和研磨棒. 3.13回旋振荡器. 4试剂和材料 4.1试剂 4.1.1盐酸：36%~38%HC1溶液. 4.1.2生理盐水：0.85%NaC1溶液. 4.1.31mol/L Tris-HCl溶液(pH8.0). 4.1.40.5mol/L EDTA溶液(pH8.0). GB31610.5-2023 4.1.510%SDS溶液. 4.1.65mol/1.NaCl溶液. 4.1.73000U/mg胃蛋白酶. 4.1.820mg/mL蛋白酶K. 4.1.9苯酚/三氯甲烷/异戊醇(25：24：1). 4.1.105U/L耐热DNA聚合酶. 4.1.1110XPCR缓冲液. 4.1.12 25 mmol/L MgCl2. 4.1.13 dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP 每种浓度为2.5mmol/L. 4.1.14琼脂糖：电泳级. 4.1.1550×TAE缓冲液，使用前用去离子水稀释成1×TAE缓冲液. 4.1.161XTE溶液(pH8.0). 4.1.1710mg/mL溴化乙锭(EB)或其他核酸染料. 4.1.186×上样缓冲液. 4.1.19100bp~2000 bp DNA分子量标准. 4.1.20引物：浓度为10gmol/L. 正向引物3S:5'-GGTACCGGTGGATCACTCGGCTCGT G-3' 反向引物A28:5'-GGGATCCTGGTTAGTTTCTTTTCCTCCGO-3' 扩增的并殖吸虫ITS2基因片段长度为520bp. 4.2试剂配制 4.2.1生理盐水：称取8.5 g NaCl溶解于900mL去离子水，再加去离子水至1000mL. 4.2.21mol/L Tris-HC1溶液：称取121.1 g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解于800mL去离子水，用盐 酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL. 4.2.30.5mol/L EDTA溶液：称取186.1gNa2EDTA2H2O(二水合乙二胺四乙酸二钠)溶解于 800mL去离...