GB 中华人民共和国国家标准 GB5009.290—2023 食品安全国家标准 食品中维生素K2的测定 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB5009.290—2023 食品安全国家标准 食品中维生素K2的测定 1范围 本标准规定了食品中四烯甲萘醌、七烯甲萘醌、九烯甲萘醒含量的液相色谱测定方法. 本标准适用于乳及乳制品、特殊膳食用食品、发酵豆制品和肉及肉制品中四烯甲萘醒、七烯甲萘醌、 九烯甲萘醌三种维生素K2分型的测定. 2原理 试样经脂肪酶、淀粉酶或蛋白酶酶解，采用正己烷提取四烯甲茶、七烯甲萘醌、九烯甲茶酿，提取 液浓缩后经反相液相色谱分离，锌还原柱柱后行生，荧光检测器检测，外标法定量. 3试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1甲醇(CHOH):色谱纯. 3.1.2无水乙醇(C2HgO). 3.1.3正己烷(CgH4). 3.1.4碳酸钾(K2CO3). 3.1.5二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯. 3.1.6四氢呋喃(C4HgO):色谱纯. 3.1.7冰乙酸(C2HO2). 3.1.8氯化锌(ZnCl2) 3.1.9无水乙酸钠(C2H3O2Na). 3.1.10磷酸二氢钾(KH2PO). 3.1.11淀粉酶：(CAS号：9000-92-4)酶活力≥4000U/g. 3.1.12脂肪酶：(CAS号：9001-62-1)酶活力≥40U/g. 3.1.13蛋白酶：(CAS号：9001-73-4)酶活力≥6000U/mg. 3.1.14氢氧化钾(KOH). 3.2试剂配制 3.2.1400g/L氢氧化钾溶液：称取20.0g氢氧化钾于100mL烧杯中，用20mL水溶解，冷却后，转移 至50mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀，储存于聚乙烯瓶中. 3.2.2磷酸盐缓冲溶液(pH8.0):称取54.0g磷酸二氢钾于500mL烧杯中，用300mL水溶解，用 400g/L氢氧化钾溶液(3.2.1)调节pH至8.0士0.2，转移至500mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀. 1 GB5009.290-2023 3.2.3流动相：称取1.5g氯化锌、0.5g无水乙酸钠于1000mL烧杯中，加入500mL甲醇、100mL二 氯甲烷（或四氢呋喃）、0.3mL冰醋酸，转移至1000mL容量瓶中，超声溶解后，加甲醇定容至刻度，混 匀，用0.22um滤膜过滤. 注：增加二氯甲烷，可以缩短保留时间，最高不宜超过150mL/L. 3.2.4二氯甲烷甲醇溶液（体积比1090）：准确吸取二氯甲烷20mL于200mL容量瓶中，用甲醇稀 释并定容至刻度，混匀. 3.3标准品 3.3.1四烯甲萘醌(MK-4)标准品(C3H4O2 CAS号：863-61-6)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标 准物质证书的标准物质. 3.3.2七烯甲萘醌(MK-7)标准品(C46HO2 CAS号：2124-57-4)：纯度≥98%，或经国家认证并授予 标准物质证书的标准物质. 3.3.3九烯甲萘醌(MK-9)标准品(CHO2 CAS号：523-39-7)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标 准物质证书的标准物质. 3.4标准溶液配制 3.4.1标准储备溶液 3.4.1.1MK-4标准储备溶液(1.0mg/mL):准确称取MK-4标准品25mg(精确至0.1mg) 用二氯甲 烷甲醇溶液(3.2.4)溶解并定容至25mL 混匀.将溶液储存于棕色玻璃容器中，一2...
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