GB 中华人民共和国国家标准 GB5009.294—2023 食品安全国家标准 食品中色氨酸的测定 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB5009.294-2023 食品安全国家标准 食品中色氨酸的测定 1范围 本标准规定了食品中色氨酸的测定方法. 本标准适用于婴幼儿配方食品、特殊医学用途配方食品和婴幼儿谷类辅助食品中色氨酸的测定. 第一法酶水解-液相色谱法 2原理 试样以蛋白酶酶解，经甲醇水稀释后，用反相液相色谱柱分离，荧光检测器或紫外检测器检测，外 标法定量. 3试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水. 3.1试剂 3.1.1甲醇(CHOH):色谱纯. 3.1.2乙酸(C2HO2):色谱纯. 3.1.3乙酸铵(C2H NO2):色谱纯. 3.1.4盐酸(HC1):12mol/L. 3.1.52-氨基-2-羟甲基-1 3-丙二醇(CHNO Tris碱). 3.1.6灰色链霉菌蛋白酶(XIV型；来源于灰色链霉菌)：活力≥3.5U/mg. 3.2试剂配制 3.2.1盐酸溶液(1.0mol/L):量取83mL.盐酸，注人300mL.水中，混匀后加水稀释至1Lo 3.2.2Tris缓冲液(0.1mol/L pH=8.5):称取6.06 g Tris碱于1000mL烧杯中，加水500mL溶解， 用1.0mol/L盐酸溶液调节溶液pH至8.5士0.05.室温下保存，保存期6个月. 3.2.3蛋白酶溶液(17.5U/mL):称取0.05g灰色链霉菌蛋白酶，用Tris缓冲液溶解并定容至10mL 使蛋白酶质量浓度为17.5U/mL 临用现配. 3.2.4乙酸铵溶液(10mmol/L pH=4.0):称取0.77g乙酸铵，加入900mL水溶解，用乙酸调节溶液 pH到4.0士0.1后加水至1000mL 经0.22um水相微孔滤膜过滤后备用. 3.3标准品 L-色氨酸标准品(C11H12N2O2 CAS号：73-22-3)：纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书 1 GB5009.294—2023 的标准物质. 3.4标准溶液配制 3.4.1L-色氨酸标准储备液(1.00mg/mL):准确称取25mg(精确至0.0001g)L-色氨酸标准品于烧杯 中，加入10mL水溶解并转移至25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀.转移至棕色玻璃容器中，于 4℃冰箱中保存，保存期6个月. 3.4.2L-色氨酸标准中间液(100μg/mL):吸取L-色氨酸标准储备液1.00mL于10mL容量瓶中，加 水定容至刻度，混匀.转移至棕色玻璃容器中，于4℃冰箱中保存，保存期6个月. 3.4.3L-色氨酸标准系列工作液：分别移取L-色氨酸标准中间液20.0L、100gL、500gL、1.00mL、 2.00mL、5.00mL于10mL容量瓶中，各加入2.40mL甲醇，加水定容至刻度，混匀.L-色氨酸标准系 列工作液的质量浓度分别为0.200g/mL、1.00μg/mL、5.002g/mL、10.0g/mL、20.0g/mL、 50.0pg/mL.临用现配. 3.5材料 3.5.1螺纹带盖的离心管. 3.5.2微孔滤膜：0.22m 有机相. 3.5.3微孔滤膜：0.22m 水相. 4仪器和设备 4.1高效液相色谱仪：带有荧光检测器或紫外检测器. 4.2分析天平：感量分别为0.01g、0.001g、0.0001g 4.3恒温培养箱：50℃士0.5℃. 4.4超声波发生器....
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