ICS67.040 C53 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T5009.118-2003 代普GB/T14933一1994 小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定 (ELISA) Determination of T-2 toxin in wheat with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) 2003-08-11发布 2004-01-01实施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会 发布 87 GB/T5009.118-2003 前言 本标准代替GB/T14933一1994《小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定方法(ELISA)》 本标准与GB/T14933一1994相比主要修改如下： —修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定(ELISA)》: 一按GB/T20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的结构进行 了修改， 本标准由中华人民共和国卫生部提出井归口， 本标准起草单位：卫生部食品卫生监督检验所， 本标准主要起草人：阳传和、罗雪云、计融， 原标准于1994年首次发布，本次为第一次修订， GB/T5009.118—2003 小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定 (ELISA) 1范围 本标准规定了小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定方法(ELISA). 本标准适用于小麦及其制品中下-2毒素的测定， 本方法的检出限为1g/kg. 第一法间接法 2原理 将已知抗原吸附在固相载体表面，洗除未吸附抗原，加入一定量抗体与待测试样（含有扰原）提取液 的混合液，竞争湿育后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分，然后加人酶标记的 抗球蛋白的第二抗体结合物，与吸附在固体表面的抗原抗体复合物相结合，再加人酶的底物.在酶的 催化作用下，底物发生降解反应，产生有色产物，通过酶标检测仪，测出酶底物的降解量，从面推知被测 试样中的抗原量. 3试剂 3.1甲醇. 3.2石油醚， 3.3三氯甲烷， 3.4无水乙醇. 3.5乙酸乙酯， 3.6二甲基甲酰胺， 3.7四甲基联苯胶(TMB) 3.8吐温-20， 3.930%过氧化氢(30%1H202) 3.10抗体：杂交瘤细胞系1D7产生的抗T-2毒素的特异性单克隆抗体， 3.11抗原：T-2毒素与载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)的结合物， 3.12兔抗鼠免疫球蛋白与辣根过氧化酶的结合物《酶标二抗)， 3.13 ELISA级冲液系统. 3.13.1包被缓冲液为pH9.6的碳酸盐缓冲液，称取1.59g碳酸钠(NaCO2) 2.93g碳酸氢钠 (NaHCO ) 加水稀释至1000mL 3.13.2洗液为含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液（简称为PBST) 配制方法为： 称取0 2g磷酸二氢钾(KHPO) 2.9g磷酸氢二钠(Na HPO 12H2O) 8 0g氯化钠(NaC) 0.2g氯化钾(KCl) 0.5mL吐湿-20，加水至1000mL 3.13.3底物缓冲液为pH5.0的磷酸-柠檬酸缓冲液，配制方法为： 0.1mol/L柠被酸(CHO H2O) 即称取柠檬酸19.2g 加水至1000mL 为甲液； 0.2mol/L磷酸氢二钠(Na:HPO1) 即称取磷酸氢二钠71.7g 加水至1000mL 为乙液： 9 ...
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