ICS67.040 C53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T5009.95-2003 代替GB/T13110-1991 蜂蜜中四环素族抗生素 残留量的测定 Determination of tetracyclines residues in honey 2003-08-11发布 2004-01-01实施 中华人民共和国卫生部 中国国家标准化管理委员会 发布 675 GB/T5009.95-2003 前言 本标准代替GB/T13110一1991《蜂蜜中四环素族抗生素残面量的测定方法》. 本标准与GB/T13110一1991相比主要修改如下： 一修改了标准的中文名称，标准中文名称改为（蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定； 一按GB/T20001.4一2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法3对原标准的结构进行 了修改. 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口， 本标准起草单位：福建省食品卫生监督检验所、福建省药品检验所， 本标准主要起草人：林升清、马赛骏、黄宏南、耿莹莹、林桂生. 原标准于1991年首次发布，本次为第一次修订， 676 CB/T5009.95-2003 蜂蜜中四环素族抗生素残留量的测定 1范围 本标准规定了用微生物管骤法测定蜂蜜中四环素族抗生素留量的方法. 本标准适用于天然或加工蜂蜜中四环索族抗生素残留景的测定. 2原理 试样中四环素族抗生素经Mellvaine缓冲液提取后，用SEP-PAKC柱纯化.四环素族三种抗生 素四环素、土霉素及金素利用薄层层析生物检测法进行分离和定性：以结样芽胞杆菌为试验菌株，用 微生物管碟法进行定量检测. 3试剂 3.1 Mellvaine缓冲液(pH4) 称取磷酸氢二钠(Na;HPO 12H2O)27.6g、柠蒙酸(C H.OH:O) 12.9g 乙二胺四乙酸二钠37.2g 用水溶解后稀释并定容至1000mL 3.20.1mol/L请酸盐缓冲液(pH4.5):称取磷酸氢二钾13.6g 用水溶解后稀释并定容至1000mL 115℃灭菌30min 置4℃冰箱中保存 3.3乙二胺四乙酸二钠水溶液《50g/L). 3.4 Waters SEP-PAKC柱（或国产PT-C柱）：用时先经10mL甲醉滤过活化，再用10mL满情水 置换，然后用10mL50g/L乙二胺四乙酸二钠流过. 3.5抗生素标准品：四环素、土霉素，金霉素标准品（由卫生部药品生物制品检定所提供）， 3.6抗生素标准溶液： 3.6.1抗生素标准原液的配制：准确称取四环素、土霉素、金霉索标准品适量（按效价进行换算），用 0.01mol/L盐酸溶解井定容至1000g/mL 置4℃冰箱中（可使用7天）， 3.6.2抗生素标准稀释液配制：临用前取上述原液按10.8剂距用0 1mol/.磷酸盐缓冲液逐步稀 释配制成标准稀释液.制备四环素、土菲索标准曲线的标准浓度为0.16 0.21 0.26 0 32 0.40， 0.50Pg/mL 参考浓度为0.25Pg/mL制备金霉素标准曲线的标准浓度为0.033 0.041 0.051 0.064， 0.080 0 100g/mL 参考浓度为0.050pg/mL.定性试验用标准液浓度四环素、土霉素为2g/mL 金莓素为1g/mL 3 7展开剂：正丁醇-乙酸-水(415)， 4仪器 4.1隔水式恒湿箱， 4.2冰箱：0℃~4℃. 4.3恒温水浴. 4 4高压灭菌器. 4.5旋转式减压蒸馏器， 4.6高心机：2000r/min. 4.7天平：感量0.1mg 4.8层析缸：内长20cm 宽15cm、高30...
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