KJ 202201 粮食及其碾磨加工品中T-2毒素的快速检测 胶体金免疫层析法.pdf

KJ 食品快速检测方法 KJ202201 粮食及其碾磨加工品中T-2毒素的快速检测 胶体金免疫层析法 2022-12-05发布 国家市场监督管理总局 发布 KJ202201 粮食及其碾磨加工品中T-2毒素的快速检测 胶体金免疫层析法 1范围 本方法规定了粮食及其碾磨加工品中T-2毒素的胶体金免疫层析快速检测方法. 本方法适用于小麦、玉米和大米等粮食及其碾磨加工品中T-2毒素的快速定性测定. 2原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理.样品中T2毒素经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合， 抑制抗体和检测线(T线)上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化.通过检测线与控制线 (C线)颜色深浅比较，对样品中T-2毒素进行定性判定. 3试剂与材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水. 3.1试剂 3.1.1乙晴(CHCN) 3.1.2盐酸(HC1 37%). 3.1.3三羟甲基氨基甲烷(C.HuNO3) 即Tris碱. 3.2试剂配制 3.2.1盐酸(11)溶液：量取适量的盐酸(3.1.2)缓慢加入到等体积的水中，搅拌混匀，冷却后待用. 3.2.2提取液(pH=8.0 1mol/L):称取121.14 g Tris碱(3.1.3)，加约900mL水溶解，混匀，用盐酸溶 液(3.2.1)调节pH至8.0，用水定容到1L. 3.3标准品 T-2毒素(C21HaO CAS号：21259-20-1)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质. 3.4标准溶液配制 3.4.1T-2毒素标准储备液(1mg/mL):准确称取T-2毒素标准品(3.3)10mg 精确到0.1mg 用乙腈 (3.1.1)溶解后，全部转移至10mL容量瓶中，定容至刻度，制成浓度为1mg/mL的标准储备液. 一18℃及以下避光保存，有效期3个月. 3.4.2T-2毒素标准工作液(10μg/mL):准确吸取T-2毒素标准储备液(3.4.1)100gL置于10mL容 量瓶中，用乙腈(3.1.1)定容至刻度，摇匀，制成浓度为10ug/mL的标准工作液，临用现配. 3.4.3标准溶液为外部获取时，管理及使用应符合相关规定. 1 KJ202201 3.5材料 T-2毒素胶体金免疫层析试剂盒：一般包含金标微孔、试纸条等. 4仪器和设备 4.1电子天平：感量分别为0.0001g和0.01g. 4.2移液器：10uL、200gL、10mL. 4.3研磨仪. 4.4离心机：转速≥4000r/min 4.5涡旋混合器. 4.6pH计：测量精度0.02pH单位. 4.7试样筛：孔径1.0mm. 4.8孵育器. 4.9胶体金读数仪（可选）. 5环境条件 环境温度20℃~35℃. 6分析步骤 6.1试样制备 取约1kg具有代表性的样品，用研磨仪磨碎并全部通过试样筛，分别装入洁净容器作为试样和留 样，密封，标记.留样置于常温保存. 6.2试样提取 称取粉碎混匀的样品2.0g(精确至0.1g)(6.1)于50mL.离心管中，加入8mL提取液(3.2.2)，涡旋 振荡3min 4000r/min离心2min 上清液即为待测液. 6.3测定步骤 吸取上述待测液200μL于金标微孔中，上下抽吸5次~10次直至微孔试剂混合均匀.温育 3min 将试纸条插入到金标微孔中，反应6min后，从微孔中取出试纸条，拭去下端的样品垫，在15min 内进行结果判定. 6.4质控试验 每批快检试剂应同时进行空白试验和加标质控试验. 6.4.1空白试验 称取空白试样，按照6.2和6.3步骤与样...