C53 ICS 67. 050 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4960-2017 出口蜂蜜中耐高温α-淀粉酶的测定 分光光度法 Determination of thermostable α -amylase in export honey- Spectrophotometriemethod 2017-11-07发布 2018-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
SN:T4960-2017 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。
本标准主要起草人：费晓庆、柳菡、陆慧媛、高玲、姜珊、李静静、吴斌、张睿、沈崇钰、 陈惠兰、赵增运。
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SN:T4960-2017 出口蜂蜜中耐高温α-淀粉酶的测定 分光光度法 1范围 本标准规定了出口蜂蜜中耐高温α-淀粉酶活性测定的分光光度法。
本标准适用于蜂蜜淀粉类糖浆的掺假鉴定。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 蜂蜜用乙酸-乙酸钠缓冲溶液溶解后，在70℃C水浴下加热处理30min，使得蜂蜜自身α-淀粉 酶失去活性，仅含有耐高温α-淀粉酶。
该溶液中加入淀粉溶液，部分淀粉被耐高温α-淀粉酶酶解，剩余的淀粉与碘反应产生蓝紫色。
随着酶解反应的进行，其产生的蓝紫色逐渐消失。
采用分光光度计于660nm波长处测定其吸光度达 到0.235需要的时间。
换算出1g蜂蜜在1h内酶解1%淀粉所需要的毫升数，即为蜂蜜中耐高温α- 淀粉酶活性。
4试剂和材料 除非另有规定，试剂均为分析纯，水为GBT6682规定的一级水。
4.1氯化钠。
4.2碘。
4.3碘化钾。
4.4乙酸钠。
4.5乙酸。
4.6可溶性淀粉。
4.70.5mol/L氯化钠溶液：称取14.5g（精确至0.01g）氯化钠（4.1），用煮沸后冷却的水定容至 500mL，有效期为1个月。
4.8碘储备液：称取8.8g（精确至0.01g）碘（4.2）和22g（精确至0.01g）碘化钾（4.3），用水定 容至1000mL，避光保存，有效期为6个月。
4.9碘工作溶液：称取20g（精确至0.01g）碘化钾（4.3）于盛有适量水的500mL容量瓶中，加人 5mL碘储备液（4.8），用水定容，混匀，每天现配。
SN/T 4960-2017 加人10.5mL乙酸（4.5），用乙酸调节至pH5.3，用水定容至500mL，有效期为1个月。
4.11可溶性淀粉溶液：称取2.000g（精确至0.1mg）可溶性淀粉（4.6）于250mL的三角烧瓶中， 加人90mL水，一边振荡烧瓶一边急速加热至沸腾，并保持3min在沸腾状态。
将溶液移入100mL 容量瓶中，用流水急速冷却至室温，用水定容并混匀。
每天现配。
5仪器和设备 5.1紫外可见分光光度计。
5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。
5.3涡旋混匀器。
5.4pH计。
5.5恒温水浴振荡器。
5.650 mL、100 mL、500 mL、 1000mL容量瓶。
6试样的制备与保存 未结晶的蜂蜜样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品或者固体样品可将瓶盖塞紧后，置于 40℃的水浴中温热，等样品全部融化后搅匀，冷却至室温。
在融化时应注意防止水分挥发。
试样于室温下保存。
7测定步骤 7.1样品前处理 精确称取10g（精确至0.01g）试样于50mL烧杯中，加人50mL1.59mol/L乙酸钠缓冲液（4.10） 和20mL水，搅拌混合，使样品完全溶解，然后移人事先加有3.0mL0.5mol/L氯化钠溶液（4.7）的 50mL容量瓶中，并用水定容至刻度。
将样品置于70C恒温水浴振荡器（5.5）中30min后冷却至室温，此样品用于蜂蜜中耐高温α- 淀粉酶的测定。
7.2淀粉溶液的标定 取5.0mL可溶性淀粉溶液（4.11）于温度为40C的10.0mL水中，充分混合。
取1.0mL此溶液 于50.0mL试管中，加人10.0mL碘工作溶液（4.9），加入适量水后充分混合。
用紫外可见分光光度 计（5.1）于660nm波长下用1cm比色Ⅲ，以水为空白对照测定吸光度，调整加水体积，使得吸光 度值在0.740~0.780范围内，记录加水的体积V（mL）。
7.3测定 准确吸取7.1中制备的样品10.0mL...
