GB/T18204.3-2000 前言 为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB9663~9673一1996，GB16153一1996《公共场所卫生标 准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准.本标准中的方法是与GB9663~9673一1996， GB16153一1996相配套的监测检验方法. 本标准第一法为仲裁法. 本标准为首次发布. 本标准由中华人民共和国卫生部提出. 本标准起草单位：江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所、北京市卫生防疫站. 本标准主要起草人：封幼玲、符晓梅、杭万双、周淑玉、高晖. 中华人民共和国国家标准 公共场所茶具微生物检验方法 大肠菌群测定 GB/T18204.3-2000 Methods of microbiological examination for tea set in public places -Determination of Coliform bacteria 1范围 本标准规定了公共场所茶具大肠菌群的测定方法. 本标准适用于公共场所内公用茶具大肠菌群的测定. 2定义 本标准采用下列定义. 大肠菌群coliform bacteria 指一群在37℃、24h培养能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌. 该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价被检物的卫生质量. 3仪器 3.1高压蒸汽灭菌器. 3.2干热灭菌箱. 3.3培养箱：36℃士1℃. 3.4水箱. 3.5电炉. 3.6天平. 3.7灭菌平皿：直径9cm. 3.8灭菌刻度吸管：1mL 10mL. 3.9灭菌棉拭子. 3.10灭菌剪刀. 3.11pH计或精密pH试纸. 4培养基和试剂 4.1乳糖胆盐发酵培养液 4.1.1成分：蛋白陈 20g 猪胆盐（或牛、羊胆盐） 5g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液 25 mL 蒸馏水 1000mL 国家质量技术监督局2000-09-30批准 2001-01-01实施 9 GB/T18204.3-2000 4.1.2制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调H至7.4，加溴甲酚紫溶液，混匀，分装到带有倒 管的试管中，每管10mL.以115℃高压灭菌15min. 注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍. 4.2伊红美蓝琼脂 4.2.1成分：蛋白陈 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 17g 2%伊红水溶液 20 mL 0.65%美蓝溶液 10 mL 蒸馏水 1000mL 4.2.2制法：将蛋白脉、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调H至7.1，分装到烧瓶内.121℃高压灭菌 15min备用，临用时加人乳糖并加热溶化琼脂，冷至50~55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板. 4.3乳糖发酵管 4.3.1成分：蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04%溴甲酚紫水溶液25mL 蒸馏水 1000mL 4.3.2制法：将蛋白陈及乳糖溶于水中，调H至7.4，加入指示剂，分装到带有倒管试管中，每管 3mL 115C高压灭菌15min. 4.4革兰氏染色液 4.4.1结晶紫染色液： 结晶紫 1g 95%乙醇 20 mL 1%草酸铵水溶液 80 mL 将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合. 4.4.2革兰氏碘液： 碘 1g 碘化钾 2g 蒸馏水 300mL 将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300L. 4.4.3脱色液： 95%乙醇 4.4.4沙黄复染液： 沙黄 0.25g 95%乙醇 10 mL 蒸馏水 90 mL ...
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