GB 4789.49-2024 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产志贺毒素大肠埃希氏菌检验.pdf

GB 中华人民共和国国家标准 GB4789.49—2024 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产志贺毒素大肠埃希氏菌检验 2024-02-08发布 2024-08-08实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布 GB4789.49-2024 食品安全国家标准 食品微生物学检验 产志贺毒素大肠埃希氏菌检验 1范围 本标准规定了食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin producing Escherichia coli STEC)的 检验方法. 本标准适用于食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌的检验. 2设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下. 2.1恒温培养箱：36℃士1℃、44℃士1℃. 2.2冰箱：2℃~5℃、-18℃~-20℃. 2.3天平：感量为0.001g. 2.4均质器. 2.5旋涡振荡器. 2.6恒温水浴箱50℃~55℃、恒温金属浴99℃士1℃. 2.7离心机：最大转速至少16000g. 2.8实时荧光定量PCR仪. 2.9混匀仪. 2.10无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度). 2.11电动移液枪或吸耳球. 2.12无菌具塞锥形瓶：容量250mL、500mL、1000mL. 2.13无菌培养皿：直径90mm. 2.14无菌均质袋：带滤网，无菌均质杯. 2.15平盖八联排管或96孔PCR微孔板. 2.16磁珠分离富集装置. 2.17微量移液器及吸头：0.2L~2gL、2gL~20L、20gL~200L、100gL~1000μL. 2.1810L无菌接种环. 2.191.5mL无菌EP管，无菌微量离心管，无菌15mL离心管. 2.200.22μm孔径无菌过滤膜. 2.21全自动微生物生化鉴定系统. 2.22基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪(MALDHTOF MS). 3培养基和试剂 3.1改良胰蛋白陈大豆液体培养基(mTSB):见A.1. 3.2EC肉汤培养基(EC):见A.2. 3.3胰蛋白胨大豆琼脂培养基(TSA):见A.3. 3.4STEC显色培养基：见A.4. GB4789.49-2024 3.5麦康凯琼脂培养基(MAC):见A.5. 3.6脑心浸出液肉汤(BH)一50%甘油：见A.6. 3.70.85%灭菌生理盐水. 3.85%Chelex100溶液：见A.7. 3.9 E buffer溶液：见A.8. 3.101mol/L盐酸溶液. 3.111XTE缓冲液：见A.9. 3.12无菌PBS缓冲液：见A.10. 3.13实时荧光定量PCR反应体系配制用试剂(10 Xbuffer、dNTPs、Tag酶和ddH2O) 3.14STEC免疫磁珠分离相关试剂或等效试剂盒. 3.15生化鉴定试剂盒或生化鉴定相关试剂. 3.16其有菌种保藏资质单位提供的志贺毒素基因(Shiga toxin gene str)阳性大肠埃希氏菌标准菌 株，即携带s.x1和/或sx2 如O157:H7[CMCC(B)44939 GDMCC1.2702或等效菌株]和s.x阴性大 肠埃希氏菌标准菌株，即不携带stx1和st.x2 如CMCC(B)44102 GDMCC1.223或等效菌株.免疫磁 珠富集处理的标准菌株：血清型O26型大肠埃希氏菌标准菌株，如CMCC(B)43221、GDMCO1.3807或 等效菌株；血清型O45 CMCC(B)43242 GDMCC1.3808或等效菌株；血清型O103 CMCC(B)43234 GDMCC1.3809或等效菌株；血清型O...