GB 中华人民共和国国家标准 GB4789.44—2020 食品安全国家标准 食品微生物学检验创伤弧菌检验 2020-09-11发布 2021-03-11实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布 GB4789.44-2020 食品安全国家标准 食品微生物学检验创伤弧菌检验 1范围 本标准规定了水产品中创伤弧菌(Vibrio vulnificus)的检验方法. 本标准适用于鱼、虾、蟹、贝类等水产品中创伤弧菌的检验. 2设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 2.1恒温培养箱：36℃士1℃. 2.2冰箱：2℃~5℃、7℃~10℃. 2.3恒温水浴锅. 2.4均质器或无菌研钵. 2.5天平：感量0.1g. 2.6PCR仪. 2.7电泳仪或毛细管电泳仪. 2.8凝胶电泳成像系统或紫外检测仪. 2.9生物安全柜. 2.10高速离心机（最大转速至少15000r/min). 2.11涡旋振荡器. 2.12微量可调移液器（量程2.5gL、10L、100L、1000L)及配套吸头. 2.13精密pH试纸或pH计. 2.14无菌试管：规格18mm×180mm和15mm×100mm. 2.15无菌吸管：规格1mL(具0.01mL刻度)和10mL(具0.1mL刻度). 2.16无菌锥形瓶：容量250mL、500mL和1000mL. 2.17 无菌培养皿：直径90mm. 2.18无菌手术剪、镊子、钳子等. 2.19PCR反应管. 3培养基和试剂 3.1蛋白胨-氯化钠-纤维二糖-多黏菌素E(PNCC)增菌液：见A.1. 3.2纤维二糖-多黏菌素E(CC)琼脂培养基：见A.2. 3.3改良纤维二糖-多黏菌素B-多黏菌素E(mCPC)琼脂培养基：见A.3. 3.43%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂培养基：见A.4. 3.5磷酸盐缓冲液(PBS):见A.5. 3.63%氯化钠三糖铁琼脂斜面：见A.6. GB4789.44-2020 3.7嗜盐性试验培养基：见A.7. 3.83%氯化钠赖氨酸脱羧酶试验培养基：见A.8. 3.93%氯化钠MR-VP培养基：见A.9. 3.103%氯化钠溶液：见A.10. 3.11氧化酶试剂：见A.11. 3.12革兰氏染色液：见A.12. 3.13邻硝基酚-B-D-半乳糖苷(ONPG)试剂：见A.13. 3.14 Voges-Proskauer(V-P)试剂：见A.14. 3.15细菌DNA提取试剂盒. 3.16生化鉴定试剂盒. 3.17PCR反应配套试剂. 3.18琼脂糖凝胶电泳配套试剂. 3.19具有菌种保藏资质单位提供的创伤弧菌标准菌株. 4检验程序 创伤弧菌检验程序见图1. 样晶25gmL)225 mL PNCC:增菌液 36℃±1℃，18h±1h 36℃±1℃.18h±1h PCR检测 阴性 阳性 划线接种于CC平板和mCPC平板 36℃±1℃，18h±1h 挑取可疑菌落，接种于3%氯化钠胰蛋白滕大豆琼脂平板 36℃±1℃，18h±1h 可选 初步鉴定：包括革兰氏染色、氧化酶试验、 PCR鉴定 三糖铁试验，嗜盐性试验 阳性 生化试验 PCR分型（选做） 结果与报告 图1创伤弧菌检验程序 2 ...
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