T/CALAS 90-2020 实验动物 小鼠肝炎病毒逆转录-环介导等温扩增（RT-LAMP）检测方法.pdf

ICS65.020.30 B44 中国实验动物学会团体标准 T/CALAS90—2020 实验动物””小鼠肝炎病毒逆转录/环 介导等温扩增(TV/NCOR)检测方法 Laboratory animal-Detection of mouse hepatitis virus by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification assay 4242-34-23”发布NNNNN甲NNN4243-23-23”实施 中国实验动物学会发布” 前言 本文件按照GB/T1.1一2020给出的规则起草. 本文件由中国实验动物学会归口. 本文件由全国实验动物标准化技术委员会(SAC/TC281)技术审查. 本文件由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草. 本文件起草单位：上海实验动物研究中心、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所. 本文件主要起草人：周洁、陶凌云、于海波、陈洪岩、李昌文. 实验动物小鼠肝炎病毒逆转录一环介导等温 扩增(RT-LAMP)检测方法 1范围 本文件规定了实验动物小鼠肝炎病毒(MHV)RT-LAMP检测的原理、方法和结果 判定. 本文件适用于实验小鼠肝炎病毒的检测. 2规范性引用文件 本文件无规范性引用文件. 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 送转录-环介导等温扩增法reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) 逆转录-环介导等温扩增法是利用4~6条特异性引物在具有链置换活性的酶溶液(Bs DNA聚合酶和AMV逆转录酶的混合溶液)作用下，恒温条件下1h内完成核酸扩增反应 的一种特异、高效、可视化的链取代核酸扩增技术. 4基本原理 DNA在65℃左右处于动态平衡状态，利用可以产生环状结构的引物和酶溶液(Bs DNA聚合酶和AMV逆转录酶的混合溶液)聚合酶链置换合成的活性，在靶序列两端引物 结合处循环不断地产生环状单链结构，达到高效扩增靶基因的目的，最后通过核酸扩增过 程中产生焦磷酸镁沉淀与荧光染料结合产生的绿色荧光判定反应结果. 5主要试剂和器材 5.1试剂 5.1.1病毒基因组RNA提取试剂盒. 5.1.2脱氧核糖核酸环介导等温扩增试剂盒. 5.1.3环介导等温扩增荧光目视检测试剂. 5.2器材 5.2.1水浴锅. ...