ICS07.080 CCS A40 T/CBPIA 中国生化制药工业协会团体标准 T/CBPIA0002—2022 肝素酶活力的测定分光光度法 Determination of the activity of heparin lyase-Spectrophotometric method 2022-11-03发布 2022-11-03实施 中国生化制药工业协会 发布 T/CBPIA0002—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草. 本文件由清华大学提出. 本文件由中国生化制药工业协会归口. 本文件起草单位：清华大学、中国标准化研究院、清华大学深圳国际研究生院、北京碧澄生物科技 有限公司、深圳湾实验室、苏州大学. 本文件主要起草人：王怡、苏楠、吴希、邢新会、张翀、徐冰、云振宇、吴琦、赵琳、张真庆. I T/CBPIA0002—2022 肝素酶活力的测定分光光度法 1范围 本文件描述了测定肝素酶活力的分光光度法. 本文件适用于生化试剂、工业酶制剂中肝素酶I、Ⅱ、Ⅲ活力的测定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 中华人民共和国药典 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 肝素酶活力单位heparin Iyase activity unit 在30℃、H7.0的条件下，每分钟酶解底物肝素或硫酸乙酰肝素产生1mol4 5-不饱和糖醛酸所需 的酶量为一个酶活力单位，单位为U. 4原理 肝素酶催化底物肝素或硫酸乙酰肝素裂解会生成4 5-不饱和糖醛酸.4 5-不饱和糖醛酸在232m波 长下有特征吸收，通过测定232m下的吸光度的变化来计算4 5-不饱和糖醛酸的生成速率，计算酶活力. 5试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水. 5.1肝素钠：CAS号9041-08-1，符合《中华人民共和国药典》规定的肝素钠的要求. 5.2硫酸乙酰肝素：CAS号9050-30-0，纯度≥95%. 5.3盐酸溶液：浓度为6mol/L. 量取500mL浓盐酸，缓慢注入400mL的水中，混匀后定容至1000mL. 5.4肝素酶I的反应底物溶液：含20mmol/L三羟基甲基氨基甲烷(Tris)、1.2mmol/L氯化钙(CaCl2)、 200mmol/L氯化钠(NaCl)及8.3g/L肝素钠，pH7.0. 使用分析天平准确称取1.21 g Tris、0.067 g CaCI2、5.84gNaC1及4.15g肝素钠(5.1)，溶解在400 mL的水中，使用盐酸溶液(5.3)在pH计上调节pH至7.0后，转移至500mL容量瓶定容，充分混匀，现 用现配. 5.5肝素酶IⅡ的反应底物溶液：含20mmol/L Tris、1.2mmol/L CaCI2、100mmol/L NaCI及8.3g/L肝 素钠，pH7.0. 使用分析天平准确称取1.21 g Tris、0.067 g CaCl2、2.92gNaC1及4.15g肝素钠(5.1)，溶解在400 mL的水中，使用盐酸溶液(5.3)在pH计上调节pH至7.0后，转移至500mL容量瓶定容，充分混匀，现 用现配. 5.6肝素酶Ⅲ的反应底物溶液：含20mmol/L Tris、1.2mmol/L CaCI2、5...
T/CBPIA 0002-2022 肝素酶活力的测定 分光光度法.pdf
