ICS07.080 CCS A40 T/CBPIA 中国生化制药工业协会团体标准 T/CBPIA0003—2022 硫酸软骨素裂解酶活力的测定分光光度 法 Determination of the activity of chondroitinase-Spectrophotometric method 2022-11-03发布 2022-11-03实施 中国生化制药工业协会 发布 T/CBPIA0003—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草. 本文件由清华大学提出. 本文件由中国生化制药工业协会归口. 本文件起草单位：清华大学、中国标准化研究院、清华大学深圳国际研究生院、北京碧澄生物科技 有限公司、深圳湾实验室、苏州大学. 本文件主要起草人：王怡、苏楠、吴希、邢新会、张翀、徐冰、云振宇、吴琦、赵琳、张真庆. I T/CBPIA0003—2022 硫酸软骨素裂解酶活力的测定分光光度法 1范围 本文件描述了测定硫酸软骨素裂解酶活力的分光光度法. 本文件适用于生化试剂、工业酶制剂中硫酸软骨素裂解酶AC和硫酸软骨素裂解酶B活力的测定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 中华人民共和国药典 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 3.1 硫酸软骨素裂解酶活力单位chondroitinase activity unit 在30℃、H7.5的条件下，每分钟酶解底物硫酸软骨素或硫酸皮肤素产生1μmol4 5-不饱和糖醛酸 所需的酶量为一个酶活力单位，单位为U. 4原理 硫酸软骨素与硫酸皮肤素分别为硫酸软骨素裂解酶AC与硫酸软骨素裂解酶B的特异性底物.硫酸 软骨素裂解酶能催化底物裂解，生成4 5-不饱和糖醛酸.4 5-不饱和糖醛酸在232m波长下有特征吸收， 通过测定232m下的吸光度的变化来计算4 5-不饱和糖醛酸的生成速率，计算酶活力. 5试剂 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水. 5.1硫酸软骨素钠：CAS号9082-07-9，符合《中华人民共和国药典》规定的硫酸软骨素钠的要求. 5.2硫酸皮肤素：CAS号54328-33-5，纯度≥95%. 5.3盐酸溶液：浓度为6mol/L. 量取500mL浓盐酸，缓慢注入400mL的水中，混匀后定容至1000mL. 5.4硫酸软骨素裂解酶AC的反应底物溶液：含50mmol/L三羟基甲基氨基甲烷(Tris)、20mmol/L 氯化钙(CaCl2)、50mmol/L氯化钠(NaCl)及1g/L硫酸软骨素钠，pH7.5. 使用分析天平准确称取3.03 g Tris、1.11 g CaCl2、1.46gNaC1及0.5g硫酸软骨素钠(5.1)，溶解在 400mL的水中，使用盐酸溶液(5.3)在pH计上调节pH至7.5后，转移至500mL容量瓶定容，充分混匀， 现用现配. 5.5硫酸软骨素裂解酶B的反应底物溶液：含50mmol/L Tris、20mmol/L CaCl2、50mmol/LNaC1及 1g/L硫酸皮肤素，pH7.5. 使用分析天平准确称取3.03 g Tris、1.11 g CaCI2、1.46gNaC1及0.5g硫酸皮肤素(5.2)，溶解在400 mL的水中，使用盐酸溶液(5....
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