ICS67.050 CCS X04 团 体 标 准 T/CIFST017-2023 葡萄球菌肠毒素测定ELISA试剂盒法 Detection of staphylococcal enterotoxins- ELISA kits method 2023-12-22发布 2023-12-22实施 中国食品科学技术学会 发布 T/CIFST017-2023 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由中国食品科学技术学会提出并归口. 本文件起草单位：北京市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心营养与健康所、澳优乳业（中 国)有限公司、北京三元食品股份有限公司、拜发分析系统销售（北京）有限公司. 本文件主要起草人：王迪、崔霞、张鹏航、陈倩、牛然、周钧、刘倩、陈历俊、刘继超、贺丽丽、葛丽花、 廖冰君. I T/CIFST017-2023 葡萄球菌肠毒素测定ELISA试剂盒法 1范围 本文件规定了食品及金黄色葡萄球菌培养液中葡萄球菌肠毒素测定的酶联免疫吸附ELISA试剂 盒方法. 本文件适用于食品及金黄色葡萄球菌培养液中葡萄球菌肠毒素及其分型的定性测定. 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件. GB4789.10食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 3方法原理 样品中游离的葡萄球菌肠毒素（抗原）与微孔中包被的抗体特异性结合，形成抗原抗体复合物.将 未与抗体结合的物质充分洗去，用酶标记物进行标记，在酶反应底物/发色剂的作用下，微孔中的液体 由无色变为蓝色.反应结束后，加入终止液终止反应，这时微孔中的液体由蓝色变为黄色.使用酶标 仪[(450nm士10nm)/(620nm士10nm)]测量微孔溶液的吸光度，样品中葡萄球菌肠毒素含量与吸光 度成正比. 4设备和材料 4.1葡萄球菌肠毒素检测试剂盒RIDASCREEN SET Total(见附录A). 4.2葡萄球菌肠毒素分型检测试剂盒RIDASCREEN四SETA、B、C、D、E(见附录B). 4.3酶标仪：(450nm士10nm)/(620nm士10nm). 4.4分析天平：感量0.01g. 4.5均质器/振荡器. 4.6培养箱：37℃士1℃. 4.7冷冻离心机：≥3500r/min ≤10℃. 4.8离心管50mL:玻璃或聚丙烯材质. 4.9单道移液器：20gL~200pL 100gL~1000gL. 4.10八道移液器：30gL~300gL. 4.11冰箱：冷藏5℃士3℃，冷冻≤一18℃. 4.12pH计：25℃条件下精度为0.01. 4.13无菌滤膜：0.22m. T/CIFST017-2023 4.14无菌注射器：10mL. 5试剂和培养基 5.1实验用水：符合GB/T6682规定的三级水要求. 5.2PBS缓冲液：8.70gNaC1、0.55 g NaH:PO4H2O、2.85gNaHPO42H2O 用水定容至1L 调pH至7.4. 5.31×洗涤缓冲液：按照1：10比例稀释10×洗涤缓冲液浓缩液.稀释后的1×洗涤缓冲液可在 2℃~8℃保存1周.若10×洗涤缓冲液浓缩液稀释前有结晶，需在37℃水浴锅中加热至完全溶解后 再配置. 5.4正庚烷：分析纯. 5.5脑心浸液培养基(BH1):10.0g胰蛋白脉、2.0g葡萄糖、5.0g牛心粉、5.0g氯化钠、2.5g磷酸 氢二钠(12H2O) 用水定容至1L 加热煮沸至完全溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min备用. 6检测程序 葡萄球菌肠毒素检测程序见图1. 食品样品 金黄色葡萄球菌培养液 样品前处理 酶联免疫吸附(ELISA) 葡萄球菌肠毒素检测 葡萄球菌肠毒素分型检测 结果判定 报告 图1葡萄球菌肠毒素检测程序 7操作步骤 7.1样品前处理 7.1.1食品样品 7.1.1.1液态样品（如生鲜乳、巴氏杀菌乳、调制乳、饮料等） 充分混匀待检样品，吸取样品10mL~25mL 3500r/min10℃离心10min 完全去除脂肪层，取 上清液进行检测，并将待检样品的pH控制在7.0士0.5范围内. 7.1.1.2粉状样品（如婴幼儿配方粉、乳粉、调制乳粉、食品原料等） 2 T/CIFST017-2023 充分混匀待检样品，称取10g~25g进行均质之后称取1g加入10mL无菌蒸馏水，漩涡混匀， 3500r/min10℃离心10m...
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