ICS65.080 B10 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1736-2009 微生物肥料菌种鉴定技术规范 Technical specification of strain identification for microbial fertilizers 2009-04-23发布 2009-05-20实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T1736-2009 前言 本标准的附录A为规范性附录，附录B、附录C和附录D为资料性附录. 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口. 本标准起草单位：农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心、中国农业科学院农业资 源与农业区划研究所. 本标准主要起草人：冯瑞华、李俊、沈德龙、姜昕、李力、杨小红、曹凤明、关大伟、陈慧君. I NY/T1736--2009 微生物肥料菌种鉴定技术规范 1范围 本标准规定了微生物肥料使用菌种鉴定程序与方法的选用原则. 本标准适用于微生物肥料科研、教学、质检和生产等领域中的菌种鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. NY/T1113一2006微生物肥料术语 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准. 3.1 细菌bacterium 形体微小，结构简单，通常以二分裂方式进行繁殖的单细胞原核生物，基本形态有球状、杆状、弧状 和螺旋状. 3.2 放线菌actinomycete 细胞呈丝状、孢子方式繁殖和高(GC)mol%的革兰氏阳性细菌. 3.3 酵母菌yeast 单核的单细胞真菌，以芽殖或裂殖方式行无性生殖，或形成孢子行有性生殖. 3.4 丝状真菌filamentous fungus 菌丝体发达，不产生肉眼可见子实体的真菌. 3.5 种species 由表型特征相似、遗传性状相近的菌株组成，并与其他类群的菌株存在明显差异. 3.6 菌株strain 属于同一个种，但来源不同的单细胞或纯培养的后代. 3.7 纯培养物pure culture 由单个细胞繁殖而来的培养物. 3.8 纯度检测purity examination 检测菌种是否为纯培养物的过程. 1 NY/T1736—2009 3.9 鉴定identification 根据通用的检索系统，对未知微生物菌株进行性状观察和测定，确定该微生物分类地位的过程. 4鉴定原则 4.1用于鉴定的菌株应为纯培养物. 4.2依据所鉴定菌株的类群和特性，选择相应的鉴定检索系统和鉴定方法. 4.3鉴定结果应与对应的鉴定检索系统或模式菌株性状进行对比，确定菌株的分类地位. 5菌种鉴定常规流程图 待鉴定培养物 纯度检测 培养特征与 生理生化 遗传特性 菌体形态观察 特性鉴定 鉴定 鉴定结果的分析、比较、确认及出具报告 6鉴定方法 6.1纯度检测 6.1.1菌落形态观察 在适宜培养基平板上，将待鉴定培养物划线或稀释涂布，经适宜条件下培养后，选取划线或稀释涂 布分离得到的单菌落，观察其在同一平板上的大小、形状、颜色、质地、光泽等. 6.1.2菌体形态观察 挑取待鉴定细菌培养物，涂布于载玻片上无菌水滴中，进行简单染色或革兰氏染色；酵母菌和丝状 真菌制成水浸片.显微镜下观察菌体形态. 6.1.3纯度确定 菌落和菌体形态一致者，确定培养物符合要求. 6.2培养特征观察 6.2.1细菌菌落特征 将待鉴定培养物划线或稀释涂布于营养肉汤培养基（附录A.1)或其他适宜的细菌培养基平板上， 适宜条件下培养2d~5d后，观察和记录幼龄和老龄菌落的大小、形状、质地、边缘、隆起、颜色、光泽、透 明度等性状. 6.2.2放线菌培养特征 将待鉴定培养物点植、划线或稀释涂布于适宜的培养基（附录A.3~A.7)平板上，28℃培养5d~ 15d 观察菌落的大小、形状、表面状况、气生菌丝、基内菌丝的颜色及可溶性色素. 6.2.3酵母菌培养特征 2 NY/T1736—2009 将待鉴定培养物划线或稀释涂布于麦芽汁琼脂（附录A.9)平板上，25℃~28℃培养3d~7d 观察 菌落的大小、形状、质地、隆起、边缘、颜色、光泽等性状. 将待鉴定培养物接种于麦芽汁液体培养基中，25℃~28℃培养3d 观察是否形成膜、菌环或岛及 沉淀. 6.2.4丝状真菌培养特征 将待鉴定培养物点植或稀释涂布于PDA培养基（附录A.11)或察氏培养基（附录A.8)平板上，25℃~ 28℃培养2d~14d 观察菌落质地、颜色、生长速度、色素的产生情况、渗出液、菌落背面的颜色等. 6.3菌体形态特征观察 6.3.1细菌形态特征 挑取在...
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