ICS67.200 X14 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T1798-2009 植物油脂中磷脂组分含量的测定 高效液相色谱法 Determination of phospholipids in vegetable oil by HPLC 2009-12-22发布 2010-02-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T1798-2009 前 言 本标准由农业部种植业管理司提出并归口. 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心. 本标准主要起草人：李培武、王秀嫔、张文、汪雪芳、陈小媚、丁小霞、谢立华、周海燕. 工 NY/T1798-2009 植物油脂中磷脂组分含量的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱法(HPIC法)测定大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂组分和含 量的方法. 本标准适用于大豆油、菜籽油、花生油、葵花籽油中磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰 肌醇(PI)的测定. 本标准磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)方法检出限分别为：0.12mg/g、 0.38mg/g、0.75mg/g. 本标准磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)线性范围分别为0.08mg/mL~ 8.00mg/mL、0.15mg/mL~15.00mg/mL、0.30mg/mL~30.00mg/mLo 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T5524动植物油脂扦样 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 油脂试料用氯仿溶解提取，氨基固相萃取柱纯化，高效液相色谱分离，外标法定量. 4试剂 除非另有说明，均使用分析纯试剂；水为GB/T6682规定的二级水. 4.1氯仿(CHCl3). 4.2乙酸(CH3OOH). 4.3乙酸铵(CH3 COONH). 4.4乙醚(CH3CH2OCH2CH3). 4.5甲醇(CH3OH) 色谱纯. 4.6正已烷(CH4) 色谱纯. 4.7异丙醇[(CH3)2CHOH] 色谱纯. 4.8乙酸-乙醚混合溶液(2144=VV):取乙酸(4.2)和乙醚(4.4)混合. 4.9氯仿异丙醇混合溶液(21=VV):取氯仿(4.1)和异丙醇(4.7)混合. 4.10正己烷-异丙醇混合溶液(1十1=VV):取正已烷(4.6)和异丙醇(4.7)混合. 4.11乙酸铵水溶液(0.025mol/L):称取1.925g乙酸铵(4.3)，用一级水溶解并定容到1000mL. 4.12磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇标准品，纯度>95%. 4.13磷脂标准储备溶液(10mg/mL):准确称取磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇 (PI)各100mg(精确至1mg) 用正已烷-异丙醇混合溶液(4.10)溶解并定量至10mL 制备成10mg/ mL的标准储备溶液.该标准储备溶液在4℃下，可以稳定储藏3个月. 1 NY/T1798-2009 5仪器设备 5.1分析天平：感量0.1mg. 5.2具塞离心管：100mL. 5.3漩涡混合器. 5.4真空旋转蒸发仪：转速为10r/min~120r/min. 5.5氨基固相萃取柱：6mL 1000mg或性能相当者. 5.6离心机：转速至少为4000r/min. 5.7液相色谱仪：带有紫外检测器；色谱柱：正相硅胶柱Si60-5 5gm 250mmX4.6mm或性能相当 者. 6试样制备 按GB/T5524进行扦样和分样，分取50g试料，装入样品瓶备用. 7分析步骤 7.1提取净化 准确称取油脂试料4g(精确至1mg) 置于100mL具塞试管(5.2)中，加人50.0mL氯仿(4.1)，漩 涡混合.先用1.0mL氯仿(4.1)活化氨基固相萃取柱(5.5)，将10.0mL油脂氯仿溶液移入氨基硅胶 固相萃取柱中，然后依次用2.0mL氯仿-异丙醇混合溶液(4.9)和3.0mL的乙酸-乙醚混合溶液(4.8) 洗脱小柱，弃去洗脱液，然后用3.0mL甲醇(4.5)洗脱出磷脂，再重复四次，并收集到的15.0mL甲醇 溶液集中，N2吹干，加人10.0mL正已烷-异丙醇混合溶液(4.10)溶解，在4000r/min下离心5min 取 上清液用于液相色谱分析. 7.2色谱分析 取磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)标准储备溶液(4.13)用正己烷-异丙醇 混合溶液(4.10)稀释至0.05mg/mL、1.0...
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