ICS 65.120 B 20 中华人民共和国国家标准 GB/T 14924.10-2008 代替GB/T14924.10-2001 实验动物 配合饲料 氨基酸的测定 Laboratory animal Determination ofamino acids for formula feeds 2008-12-03发布 2009-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布 数伪
GB/T 14924.10-2008 前言 本标准自实施之日起代替GB/T14924.10-2001（实验动物配合饲料氨基酸的测定》. 本标准与GB/T14924.10-2001相比主要技术差异如下： a）按照GB/T20001.4-2001《标准编写规则第4部分：化学分析方法》对原标准的文字进行 了修改： b）对原引用的标准进行调整； c)并对原标准中的错误进行了改正. 本标准由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口. 本标准起草单位：全国实验动物标准化技术委员会， 本标准主要起草人：张瑜、贾建斌、周瑞华、王竹、王国栋、刘源. 本标准所代警标准的历次版本发布情况为： -GB/T 14924-1994 GB/T 14924.10-2001.
GB/T 14924.10-2008 实验动物配合饲料 氨基酸的测定 1范围 本标准规定了实验动物配合饲料中氨基酸的测定方法. 本标准适用于实验动物小鼠、大鼠、免、原鼠、地鼠、犬和联的配合饲料及其原料中氨基酸的测定. 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T5009.124食品中氨基酸的定 GB/T15400饲料中色氨酸测定方法分光光度法 GB/T18246-2000饲料中氨基酸的测定 3别定方法 3.1配合饲科中氨基酸的测定 按GB/T18246-2000或GB/T5009.124中相关规定执行. 3.2配合饲科中色氨酸的测定 3.2.1第一法高效液相色谱法 按GB/T18246-2000附录A“色氨融的测定反相高效液相色谱法"规定执行. 3.2.2第二法荧光分光光度法 3.2.2.1原理 在蛋白质的碱水解液中，只有色氨酸和器氨酸可以检测到荧光.在pH为11时，色氨酸的荧光强 度比路氨酸大100倍，且色氨与降氨酸荧光峰相差40nm以上，根据该特点，采用磁水解法处理蛋白 质，然后通过测定色氨的天然荧光，对色氨进行定量分析. 3.2.2.2试剂 除另有说明外，试剂均为分析纯，实验用水为一级水. 3.2.2.2.1可溶性淀粉. 3.2.2.2.2氢氧化钠（NaOH）. 解并定容至100mL，临用前配制. 3.2.2.2.4尿素溶液（4mol/L，pH11）. 3.2.2.2.5盐酸溶液（11）：1份浓盐酸（优级纯）加1份重蒸馏水混合. 3.2.2.2.6澳百里酚蓝水溶液（0.5g/L)：0.1g澳百里璐蓝，加0.1mol/L氢氧化钠溶液1.6mL溶 解，加水至200mL. 3.2.2.2.7高纯氮（含量99.99%）. 1
GB/T 14924.10-2008 溶液溶解并定容至100mL. 3.2.2.2.10色氨酸标准应用液（0.20mg/mL）：准确吸取色氨酸标准贮备液10.0mL于50mL容量 瓶中用水稀释至刻度，使用时现配. 3.2.2.3仪器 3.2.2.3.1荧光分光光度计. 3.2.2.3.2减压蒸发器. 3.2.2.3.3聚四氟乙烯管（5mL）. 3.2.2.4试样处理 试样粉碎后，贮于试样瓶中备用. 3.2.2.5分析步骤 3.2.2.5.1试样制备：准确称取含粗蛋白质约500mg的试样，置于聚四氟乙烯管中.加含可溶性淀 粉的氢氧化钠溶液1mL，加人一滴辛醇，将试样管放在一可密封的容器内.该容器内加冰、盐降温，抽 真空[1.33×10²Pa（10mmHg）以下]保持15min，充氮气再减压，反复进行三次，将充氮减压容器密 封，放人110C烘箱中，碱水解试样22h，试样冷却后加0.7mL盐酸溶液（11），用重蒸馏水将试样 分别洗入25mL容盈瓶中.用澳百里酚蓝作指示剂，调pH至中性，用重蒸馏水定容至刻度. 3.2.2.5.2测定：吸取试样液1.0mL，于10mL带塞刻度试管中，加4mol/L尿素溶液（pH11）秘释 至10mL.于激发波长280nm，发射波长360nm下测定荧光强度，从工作曲线上查出该试样中色氨酸 的含量. 3.2.2.5.3校准曲线的绘制：取双份聚四氟乙烯试管分别取色氨酸标准应用液0.0mL、0.5m...
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