BCS 65. 140 B 47 中华人民共和国国家标准 GB/T23195-2008 蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法 紫外分光光度法 Method for the determination of catalase in bee pollen Ultaraviolet spectrophotometry 2008-12-31发布 2009-06-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
GB/T 23195-2008 前言 本标准由中华全国供销合作总社提出开日口 本标准起草单位：广州市宝生国有限会司、华商农业大学. 本标准主要起京人：郑隆，刘伟，陈作彬.
GB/T 23195-2008 蜂花粉中过氧化氢酶的测定方法 紫外分光光度法 1范围 本标准规定了维花粉中过化氢所的测定方法 本标准适用于修花粉中过氧化实前的洲定 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款，凡是注目所的引用文件，其随始 的修改单（不包括勘面的内容）或修订版均不适用于本标票，然面，效结根据本标准达成持议的各方新究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标冻， GB/T6582分析实象室用水现格和试验方法（G1T66822008.ISO35951987 MG) 3原理 过氧化气在210nm该长下有函烈吸收，过化前分邮过氧化宝，使反应溶流光度在一定范 围内随反应时间面降低，根据测量吸光度的变化速度即可测定过筑化气输的活性. 4试剂 除非另有说明-在分析中仅使用分析纯试剂和符合GB/T6582夏求的英水或去离子水. 4.1酸域冲液：p为6.8~7 c.浓为50mmol/1含有1mmol/L乙二乙酸二销（DTA） 准确称取17.51gNaH1N-12HO加蒸水溶解并稀释至500ml.作为A液： 确称取7 80gNHP）2H0加英集水溶解并释至500m作为B液 准确量取55.0ml.A液与45.0ml.B液于200ml.烧杯中.加人0.07gEITA.加水稀湿 （加至150ml左存）.用酸度计标定至6.8~7.0.转人200ml.容量瓶中，定容至刻度-混匀. 4.2过氧化氢溶液：体积分数为0.1% 准确吸取0.5ml30%过氧化气置于50ml.棕色容量低中-用酸缓冲液（4.1）定容至刻度，温匀， 从中准确量取10 0ml.于100ml.三角钳班（用光）中.再准确量取20 0ml.的酸缓冲液（4.1）加人湿 4.3液. 5仪器设备 标准分享网 5.1张外分光光度计 .. 5.2冷冻离心机 5.4酸. 5.5分析天平，感量0.1mg 5.6移波他，100 pL.5 000 yl. 6待测液的制备 称取1g样品蜡到1mg，置于已用适量液氮预冷的瓷体中.加液知边研磨.待品充分研
GB/T 23195-2008 磨后.静置至研体解冻升温后加人约10ml.新例配别的硝酸缓冲（4.1）游解-转人25ml.容量瓶中. 并用酸缓冷液冲统调体数次，合并洗液并定容至度，混合均匀后将容账置C冰箱中静置 30mi.取上请液在低湿离心机4C 12000r/min的条件下离心15mm.取港清液即得待测流 7.1外分光光度计参数为：方式：时间扫，波长：240mm测定时间：120s读数间隔：55 7.2将排液及过氧化氯溶（4.2）分别置于40C温水路得中10min-准唤吸取样液0 1m于石英 Ⅲ中-将在英致植中（末收石英前仅器已消零）.再准晚吸取29mL过筑化氢济液（4.2）加人 英中.混合均匀，立即开输读数 7.3从0~90s中我取线性较好的1mim.计算其吸光度差值 8计算与表述 以1min内过氧化氢在240nm波长下吸光度减少0.01的酶为1个期法单位（U），过化氢 活性（U/g）按式（1)计算， 化包活性- 0.01XXVX 44xV. 式中： a4-结果中选取的1min暖光现差： V该总体积单位为毫升（ml） 0.01210mm波长下吸光度号下降 01为1个期运单位（U） 1 min V测定用样液体积，单位为毫升（mL）： 品质缺，单位为克（g） 计算结聚表示到警数位报告结果为平行测定结架的算术平均值 9先诗 一实验室平行洲定或复面定站第和对标二10 .hzfxw....
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