ICS 65.020.30 B40 中华人民共和国国家标准 GB/T 24862-2010 畜禽体细胞库检测技术规程 Technicalregulation of farm animals somatic cell bank detection 2010-06-30发布 2011-01-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会
GB/T24862-2010 前言 本标准的附录A为资料性附录. 本标准由中华人民共和国农业部提出. 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口. 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所. 本标准主要起草人：马月辉、关伟军、李向臣、于太永、李哈、何晓红、刘涛.
GB/T 24862-2010 畜禽体细胞库检测技术规程 1范围 本标准规定了畜食体细胞库检测方法. 本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽体外培养细胞鉴定. 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准. 3. 1 细胞活率cellmotilityrate 活细胞占总细胞的百分比. 3.2 细胞生长曲线cellgrowthcurve 在一代细胞生存期内，依据潜伏期、指数增长期、停滞期和衰亡期细胞动态变化的数值，以细胞培养 时间为横坐标、细胞密度为纵坐标而绘制的细胞生长规律曲线. 3.3 核型karyotype 体细胞分裂中期整套染色体按照其数目、长度、着丝点位置、随体、主痕和次举痕等相对恒定特征 排列起来的图像. 3.4 同工酶isozyme 功能相同结构各异的一类催化酶. 3.5 汇合度confluency 细胞占其培养表面的比例， 4工作区条件 工作区一般要由准备室、缓冲闻、无菌室、细胞保存室组成. 其中，缓冲间面积应不小于3㎡²，并设有更衣柜和紫外灯，紫外灯的强度不少于1.5W/m，紫外线灯 管距地面不应超过2.5m，每次照射时间为20min~30min.无菌室无菌等级的最低标准应达到万级. 5主要仪器、设备 电泳仪及电泳槽、超净工作台、冰箱、鼓风干操箱、高压蒸汽消毒器、液氮生物容器、离心机、电子天 平、恒温培养箱、CO培养箱、超纯水装置、凝胶自动成像分析系统和显微镜等. 1
GB/T 24862-2010 6清洗与消毒 6.1玻璃器皿清洗与消毒 6.1.1浸泡 所需的玻璃器Ⅲ在含有洗涤剂的清水中浸泡12h. 6.1.2洗 选软毛毛刷，反复洗刷后用清水冲洗3次，三蒸水冲洗3次后，60C下烘干后备用. 6.1.3酸浸 酸浸时间为24h. 6.1.4冲洗 酸浸后先用自来水反复冲洗10次以上，最后用重蒸水浸洗3次～5次，烘干包装， 6.1.5消毒 高压灭菌应以0.14MPa~0.16MPa的压力下持续15min~30min. 6.1.6初次玻璃器血使用 初次使用玻璃器Ⅲ需要先经过漫泡和洗剧再置于5%稀盐酸溶液中浸泡12h以上，其余操作同 6.1.3、6.1.4和6.1.5等步骤. 6.2金属器Ⅲ清洗与消毒 金属材质的器具除了没有酸浸处理步外，其余步骤同6.1. 6.3塑料与橡胶制品清洗与消毒 塑料和橡胶材质的器具用清水浸泡和冲洗同玻璃器Ⅲ清洗，之后还需要用2%的NaOH溶液浸泡 12h，清水冲洗和烘干后用1%稀盐酸浸泡30min，再用清水和三蒸水分别冲洗3次，高压灭菌和烘干 后备用，高压灭菌以0.073MPa的压力下持续10min. 7主要试剂与溶液配制 主要试剂与溶液配制参见附录A.除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂.实验用水符合 GB/T6682一级用水的要求 8体外培养细胞鉴定 8.1细胞形态检测 8.1.1光学显微镜检测 在倒置相差显微镜下，直接观察和记录培养细胞的形态和生长状况.刚贴壁细胞边界清晰，核呈圆 形，核浆比率小，细胞排列整齐，无重叠生长. 8.1.2Giemsa染色检测 将盖玻片置于细胞培养瓶中，在5%CO培养箱中37C培养，细胞形成单层后，取出盖玻片，用磷 酸缓冲盐溶液（phosphatebuffered saline，PBS）冲洗，放在载玻片上，自然干燥.固定液固定10 min， Giemsa染色2min，置于显微镜下观察.正常细胞的细胞核被染成紫红色或蓝紫色，细胞质被染成浅 红色. 8.2微生物检测 8.2.1细菌和真菌检测 取5pL细胞悬液，置于8mL无抗生索培养基中，混匀，300g离心5min，重复2次.再用2mL无 抗生素培...
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