T/CSHB 河北省协会团体标准 T/CSHB 0010-2024 猪瘟荧光PCR快速检测技术规范 Technical specifications for rapid detection of swine fever using PCR 2024-7-22发布 2024-7-22实施 河北省协会发布
目次 前 言 1范围， 2规范性引用文件 3术语和定义， 4缩略语... 5试剂和材料 6仪器与设备， 7样品采集与处理， 8检测.. 9存储..
前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
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本文件由唐山怡安生物工程有限公司提出.
本文件由河北省协会归口.
本文件起草单位：唐山怡安生物工程有限公司、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、北京动物疫 病预防控制中心、河北省动物疫病预防控制中心、四川省动物疫病预防控制中心、杭州依思康医药科技 有限公司、唐山兽医检验检测研究院有限公司、河北国安生物工程有限公司、苏州润利生物技术有限公 司、北京快乐星生物科技有限公司、北京贝妥妥动物保健科技有限公司、河北宝盈生物技术有限公司、 北京宝易生物技术有限公司、华北理工大学、中德信总技术（天津）有限公司.
本文件主要起草人：李润、刘静、装雅芳、陈兆婧、李辰龙、陈晴、李丽、李松励、李明、刘激雨 余琦、张启龙、马宏伟、韦景平、顾文源、韩庆安、陈斌、吴超、柴文琴、查银河、舒建洪、高云、杨 广利、李振义、钟启迪、杨晓明、杨宇、安志军.
猪瘟荧光PCR快速检测技术规范 1范围 本文件规定了猪瘟荧光PCR快速检测技术的试剂和材料、仪器设备、样品的采集与处理、操作方法、 结果判定和存储.
本文件适用于猪瘟快速检测，适用于对临床样本中的猪瘟病毒（Classicalswinefevervirus，CSFV） RNA进行定性检测.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
NY/T541兽医诊断样品采集、保存于运输技术规范 GB/T27540-2011猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件.
3.1 扩增Amplification 指基因扩增，细胞内染色体上的某一个基因选择性地拷贝数大量增加的现象.
3.2 扩增曲线Amplification Curve 指在分子生物学实验中，通过连续监测反应体系内生物分子的浓度变化，得到的曲线图.
4缩略语 荧光PCR：荧光聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction） FAM：6-羧基荧光素（6-carboxfluorescein） CSFV：猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus） RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid） EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetra acetic Acid）
DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethl pyrocarbonate） 5试剂和材料 5.1试剂 除另有说明，试剂均为分析纯，试剂均用无RNA酶的容器分装.
5.1.1RNA核酸提取试剂盒 5.1.2PCR反应液 5.1.3阳性对照品 5.1.4阴性对照品 5.1.5酶混合液 5.1.6 DEPC水 去离子水中加入0.1%DEPC，37°C作用1h，（121±2）°C，高压灭菌15min.
5.2材料 放血工具、离心管、一次性手套、真空采血管（含EDTA抗凝剂）、研钵/组织匀浆器、开口器、消 毒剂、编号笔、消毒液容器、拭子等.
6仪器与设备 6.1核算提取仪 6.2高速台式冷冻离心机：可控温至4C，离心速度可达12000g以上 6.3涡旋震荡仪 6.4冰箱：2~8°℃和-20°C以下 6.5适用仪器 试剂盒适用于AB17000/7300/7500/7900、ABIStepOnePlus、宏石SLAN-48P/96S、RochelightCycler480、 RochelightCycler96、AglientMX3000P/3005P、iCycleriQ、Bio-RadCFX96等荧光定量PCR仪.