ICS 65.020.20 CCS B 16 中华人民共和国国家标准 GB/T 44342-2024 苏铁叶枯病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Didymella glomerata（Corda）Qian Chen&L.Cai 2024-08-23发布 2025-03-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布
GB/T 44342-2024 目次 前言 范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4苏铁叶枯病菌基本信息 5方法原理 6试剂、材料和培养基 6.1试剂和材料 6.2培养基 7仪器和用具 2 7.1仪器 2 7.2用具 8检疫鉴定方法 8.1病害症状 8.2病原菌分离培养和形态鉴定 8.3分子生物学鉴定 3 9结果判定 10样品和档案保存 3 10.1样品保存与处理 3 10.2 菌株保存与处理 10.3 结果记录与资料保存 附录A（资料性） 苏铁叶枯病菌的其他信息 A.1 病害情况 A.2 寄主范围 A.3 分布范围 A.4 传播方式 A.5 病害症状 A.6 病原菌形态特征 附录B（资料性） 苏铁叶枯病菌培养基配制方法 10 B.1 马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基 10 B.2燕麦片琼胶（OA）培养基 10 附录C（资料性）苏铁叶枯病菌DNA提取 11 C.1DNA提取方法（改良CTAB提取法） 11 C.2DNA纯度与浓度的测定 11
GB/T 44342-2024 附录D（规范性）苏铁叶枯病菌实时荧光PCR检测方法 12 D.1引物和探针序列 12 D.2实时荧光PCR反应体系 12 D.3结果判定 12 附录E（规范性） 苏铁叶枯病菌a微管蛋白ab2片段PCR扩增方法 13 E.1 引物序列 13 E.2PCR反应体系及参数 13 参考文献 15
GB/T44342-2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草.
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本文件由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口.
本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、中国科学院微生物研究所、深圳仙湖植物园、宁波海 关技术中心、福建省热带作物科学研究所、西藏自治区高原生物研究所.
本文件主要起草人：刘芳、黄英、程颖慧、蔡磊、徐晗、段维军、蔡江桥、罗金水、王聪、严进、 普布多吉.
GB/T 44342-2024 苏铁叶枯病菌检疫鉴定方法 1范围 本文件描述了苏铁叶枯病菌（Didymella glomierata）的分离培养、形态学鉴定、分子生物学鉴定 方法.
本文件适用于植物及其产品中苏铁叶枯病菌的筛查鉴定.
2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件.
3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4苏铁叶枯病菌基本信息 学名：Dicdymella glomerata ( Corda） Qian Chen &. L. Cai 异名：Coniothyrison glomeratom Corda Icon. Fungorum ( Prague ) 4: 39. 1840. Aposphaeria glomerata ( Corda ) Sacc. Syll. Fung.( Abellini ) 3: 175. 1884. Phoma glomerata ( Corda ) Wollenw. &. Hochapfel Z. Parasitenk. 3 ( 5 ) : 592. 1936. Peyroneffaeo glomeratα ( Corda ) Goid. ex Togliani Ann. Sperim. Agrar. Il 6: 93. 1952. 中文学名：团集亚隔孢壳 中文异名：葡萄茎枯病菌 分类地位：真菌界Fungi.子囊菌门 Asycota，座囊菌纲 Dothideomycetes，格孢腔菌目 Pleospor- ales，亚隔孢壳科Didymellaceae，亚隔孢壳属Didywaella.
苏铁叶枯病菌与亚隔孢壳属中其他物种的形态特征相似，难以单纯依靠形态特征进行区分.
近缘种 包括 D.anerina、D.aarea、D maoae 等.
苏铁叶枯病菌的其他信息见附录A.
5方法原理 根据病害症状、分离菌的形态特征（见附录A），以及实时荧光聚合酶链式反应（PCR）检测方法 或微管蛋白b2序列特征对苏铁叶枯病菌进行检测鉴定.
6试剂、材料和培养基 6.1试剂和材料 除有特殊说明外，试验用试剂均为分析纯或生化试剂.
分离培养所需试剂和材料：马铃薯、燕麦片、蒸馏水、葡萄糖、琼脂粉、次氯酸钠、75%乙醇、无菌水.