ICS 59.080.01 CCS W 04 中华人民共和国国家标准 GB/T 40175.32021 纺织品生物化学分析方法 第3部分：有机磷类农药（酶联免疫法） Textiles-Methods of biochemical analysis-Part 3:Organophosphorus pesticide (enzyme-linked immunosorbent assay) 2021-05-21发布 2021-12-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布
GB/T 40175.3-2021 前言 本文件按照GB/T1.1-2020（标准化工作导期第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
本文件是GB/T40175《纺织品生物化学分析方法》的第3部分.
GB/T40175已经发布了以下 部分： 第1部分：镉和铅（胶体金法）： 第2部分：拟除虫菊酯类农药（酶联免疫法）： 第3部分：有机磷类农药（爵联免疫法）. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.
本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中国纺织工业联合会提出.
本文件由全国纺织品标准化技术委员会（SAC/TC209）归口.
本文件起草单位：南京海关工业产品检测中心、江南大学、中纺标（深圳）检测有限公司、南京师范大 学、南京海关动植食产品检测中心、上海天祥质量技术服务有限公司、江苏省检验检疫科学技术研究院、 晋江中纺标检测有限公司、纺织工业标准化研究所.
本文件主要起草人：吴丽娜、压华、唐泰山、周静珠、刘丽强、周佳、斯颖、王建平、蔡建和，
GB/T 40175.3-2021 纺织品生物化学分析方法 第3部分：有机磷类农药（酶联免疫法） 警示：使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验.
本文件并未指出可能的安全问题.
使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件.
1范围 本文件规定了纺织品中甲基对硫磷、甲基对氧磷、杀硫磷、倍硫磷四种有机磷类农药残留量的酶 联免疫检测方法.
本文件适用于各种纺织品.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 试样中的有机磷类农药与试剂盒中已包被在酶标板上的有机磷类农药抗原竞争性结合有机磷类农 药抗体，再加人酶标二抗，在酶标板上形成抗原-一抗-酶标二抗复合物.
复合物与显色剂发生反应，用 酶标仪测定吸光度值，吸光度值与试样中的农药残留量呈负相关.
5试剂与材料 所用试剂应均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的三级水.
5.1有机磷类农药测定酶联免疫试剂盒：附录A给出了一种有机磷类农药酶联免疫试剂盒示例，试剂 盒组成如下： a）酶标板.
b）有机磷类抗体工作溶液.
c）酶标二抗.
d）甲基对硫磷标准工作溶液：可使用试剂盒中提供的标准工作溶液，也可按如下方法配制.
准确称取50.0mg甲基对硫磷标准品（CAS号298-00-0，纯度≥99%）置于100ml容量瓶中， 加人少量甲醇（5.6）溶解后，用甲醇定容至刻度，浓度为500.0mg/L，然后根据需要的系列标
GB/T 40175.3-2021 准溶液工作浓度进行稀释.
e）底物A液：每升包含13.6g醋酸钠、1.6g柠檬酸、0.3ml.过氧化氢（30%）的水溶液.
D）底物B液；每升包含13.6g醋酸钠.1.6g柠檬酸，0.2g3.3'，5，5'-四甲基联苯胺的水溶液.
g）终止液：每升包含54.3mL浓硫酸（98%）的水溶液.
温20 的水溶液.
5.2洗涤液：使用前将浓缩洗涤液5.1h）按照体积比119加水稀释（1份浓缩洗涤液9份水）.
5.3显色液：使用前将底物A液5.1e）和底物B液5.1f）按体积比1：1混合.
5.4正已烷.
5.5乙酸乙酯.
5.6甲醇.
5.7磷酸盐缓冲溶液（0.01mol/L）：在800mL去离子水中溶解8.0g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷 酸氢二钠和0.24g磷酸二氯钾.用0.01mol/1.盐酸词节溶液的pH值至7.4.加水定容至1000ml.
5.8甲醇-磷酸盐缓冲溶液：按照体积比114将甲醇与缓冲溶液（5.7）混匀.
6设备仪器和器Ⅲ 6.1酶标仪：波长450nm. 6.2天平：感量0.1g和0.0001g. 6.3微量可调移液器及配套吸头；50gl、100pL、1000pl.
6.4可控温的超声波浴：工作频率为40kHz，控温精度为±5℃C.
6.5氮吹仪.
6.6烘箱：控温精度为土1℃.
6.7pH计：配备玻璃电极，测量精度至少精确到0.1. 7试验步骤 7.1试样前处理 称取5g代表性的试样，剪碎至5mm×5mm以下，混匀.
从混合样中称取1.0g试样，置于 50mL带旋盖的离心管中.
准确加人20ml体积比为1：1的正己烷（5.4）和乙酸乙酯（5.5）混合溶剂， 置于45C的超声波浴（6.4）中萃取30min.取1mL萃取液，氮气吹干.用100xl.甲醇-磷酸盐缓冲溶液 （5.8）复溶，待测.
7.2酶联免疫检测 7.2.1测试前需要将试剂放置至室温（20℃～25C）后方可使用.
7.2.2取系列甲基对硫磷标准工作溶液5.1d）和待测样品溶液（7.1）各50μL分别加入至相应的酶标板 5.1a）孔中，每个溶液平行测试2个，然后再分别加人50gl.有机磷类抗体工作溶液5.1b），在烘箱（6.6） 中37℃下反应30min 7.2.3弃去孔中液体.并将酶标板5.1a）剩余残液在吸水纸上拍干.
每孔注满洗涤液（5.2），轻轻振荡， 放置2min，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复洗涤4次， 7.2.4在每孔中加人50xL酶标二抗5.1c），在烘箱（6.6）中于37C下反应30min.
7.2.5弃去孔中的液体，并将酶标板剩余残液在吸水纸上拍干，每孔注满洗涤波（5.2），轻轻振荡，放置 2min，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复洗涤4次.
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GB/T 40175.3-2021 7.2.6在每孔中加人50pL显色液（5.3），在烘箱（6.6）中于37℃下避光显色15min， 7.2.7在每孔中加人S0pl.终止液5.1g）以终止反应，于10min内用波长450nm的酶标仅（6 1)测定 吸光度值.
7.3空白试验 在不加试样的情况下，按上述步骤进行试验.
8结果计算与表达 8.1相对吸光度值的计算 分别计算标准溶液和样品溶液的平均吸光度值，按公式（1）计算标准溶液或样品溶液的相对吸光 度值， A= B × 100% 式中： A-相对吸光度值； B-系列标准工作溶液或样品溶液的平均吸光度值； B.
-0μg/L标准工作溶液的平均吸光度值.
8.2绘制标准工作曲线 以相对吸光度值为组坐标（%），标准工作溶液浓度（pg/L）的对数值为横坐标，绘制标准工作曲线.
每次试验均应绘制标准工作曲线.
8.3有机磷类农药浓度的计算和结果表达 从8.2中绘制的标准工作曲线上，读取样品溶液相对吸光度值所对应的有机磷类农药浓度，按公 式（2）计算试样中的有机磷类农药的含量.
x_20××V m 式中： X-试样中有机磷类农药的含量，单位为微克每千克（pg/kg）； 一从标准工作曲线上得到的试样中有机磷类农药浓度，单位为微克每升（pg/L）； V复溶后样品溶液体积，单位为毫升（mL.）： 试样质量，单位为克（g）.
计算结果应扣除空白，精确至一位小数.
如被测试样中有机磷类农药含量小于2.0pg/kg，则结果表示为未检出；如含量超过或等于2.0pg/kg， 则结果为实测值，宜使用GB/T18412.3中规定的方法或其他仪器分析方法再进行检测， 9检出限 以甲基对硫磷计，检出限为2.0μg/kg， 10试验报告 试验报告至少应给出下述内容：