ICS 01. 040. 11 CCS C10/29 T/HBIQA 河北省检验检疫学会团体标准 T/HB1QA0005-2024 人体血液中5种雷帕霉素靶蛋白类抑制剂 药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of five rapamycin target protein inhibitors in human blood by HPLC-MS/MS 2024-08-15发布 2024-10-15实施 河北省检验检疫学会发布
T/HBIQA 00052024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草.
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本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由河北省检验检疫学会提出并归口.
本文件起草单位：河北省药品医疗器械检验研究院、河北科技大学.
本文件主要起草人：李挥、李怡霖、梁艳、宋莉、王婷.
T/HBIQA 0005-2024 人体血液中5种雷帕霉素靶蛋白类抑制剂药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了人体血液中5种雷帕霉素靶蛋白类抑制剂药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方 法.
本文件适用于人体血液中维妥色替，AZD8055，GDC-0941，依维莫司，替西罗莫司含量的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.
3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 样品用乙晴提取、无水硫酸镁盐析、十八烷基键合硅胶（C18）净化后，涡旋混匀、冷冻离心、氮 吹复溶，进行液相色谱-质谱/质谱法测定，内标法定量.
5试剂和材料 5.1试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1.1 甲醇：色谱纯.
5.1.2 乙晴：色谱纯.
5.1.3 甲酸：色谱纯.
5.1.4无水硫酸镁.
T/HBIQA 0005-2024 5.1.5N-丙基乙二胺（PSA）. 5.1.6标准品：维妥色替（CAS号：1009298-59-2），AZD8055（CAS号：1009298-09-2），GDC-0941 （CAS号：957054-30-7)，依维莫司（CAS号：159351-69-6），替西罗莫司（CAS号：162635-04-3）， 他克莫司（CAS号：104987-11-3）纯度均≥98%.
5.1.7混合标准储备溶液的配制：分别称取维妥色替，AZD8055，GDC-0941，依维莫司，替西罗莫司 1mg（精确到0.01mg)，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分别配制成维妥色替， AZD8055，GDC-0941，依维莫司，替西罗莫司的储备溶液，于-20°C保存至分析.
5.1.8标准中间溶液的配制：取500μL标准储备溶液（5.1.7）至50mL量瓶中，加甲醇稀释，混匀， 得到1ug/mL的标准中间溶液于-20C保存备用.
5.1.9内标储备液的配制：称取1mg（精确到0.01mg）他克莫司，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并 定容至刻度，得到0.1mg/mL的内标储备液，于-20C保存至分析.
5.1.100.1%（体积分数）甲酸水溶液：准确移取甲酸1.0mL置于1L量瓶中，用水定容，混匀.
6仪器设备 6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）.
6.2氮吹浓缩仪.
6.3涡旋震荡仪.
6.4电子分析天平（精度0.01mg）.
6.5高速冷冻离心机（最高转速22000rpm）.
7试样制备 全部血液样本充分混匀后，在4C、3000r/min条件下离心10min，取管内上清液分装，-80°C储存 待测.
8试验步骤 8.1试样预处理 取200μL血液试样（7）于5mL离心管中，准确加入2mL乙晴、400mg无水MgSOg和30mgC18 进行盐析和净化，涡旋混匀30s后，经12000r/min，4°C的冷冻离心10min.
取出200uL上清液，氮 吹浓缩至干，加入500uL含有内标的甲醇溶液作为复溶溶剂，复溶后涡旋混匀30s，过0.22um微孔 2
T/HBIQA 00052024 滤膜，待测定.
8.2标准曲线 取相应的空白样品，按照7步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将混合标准储备溶液逐级稀 释，得到维妥色替、AZD8055、GDC-0941浓度为1、2、5、10、20、80ng/mL，依维莫司浓度为2.5、 5、12.5、25、50、200ng/mL，替西罗莫司浓度为10、20、50、50、100、200、800ng/mL的系列混合 标准工作溶液（内标他克莫司的浓度为50ng/mL），浓度由低到高进行检测，以分析物与内标定量离 子的峰面积比值对质量浓度作图，做出内标标准曲线回归方程.
8.3仪器参考条件 8.3.1液相色谱参考条件 a.色谱柱：Zorbax extend-C18 RRHD (2.1×100 mm，1.8 μm)，或相当者.
b.流动相：A相为0.1%甲酸、2mmol/L乙酸铵的甲醇溶液：B相为0.1%甲酸、2mmol/L乙酸铵 的水溶液.
c.柱温：40℃.
d.进样体积：5uL.
e.流速：0.3mL/min.梯度洗脱程序见表1： 表1梯度程序洗脱表 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 1 20 80 3 95 5 7 95 5 9 20 80 01 20 80 8.3.2质谱参考条件 a.电离方式：电喷雾电离，正离子模式.
b.电喷雾电压：3500V. c.鞘气流速：50Arb.
d.辅助气流速：10Arb. e.离子传输温度：325℃.