ICS 01.040.11 CCS C10/29 T/HBIQA 河北省检验检疫学会团体标准 T/HB1QA 0006-2024 人体血液中9种酪氨酸激酶类药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of nine tyrosine kinase drugs in human blood by HPLC-MS/MS 2024-08-15发布 2024-10-15实施 河北省检验检疫学会发布
T/HBIQA 00062024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草.
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本文件由河北省检验检疫学会提出并归口.
本文件起草单位：河北省药品医疗器械检验研究院、河北科技大学.
本文件主要起草人：李挥、李怡霖、梁艳、宋莉、姜文.
T/HBIQA 0006-2024 人体血液中9种酪氨酸激酶类药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了人体血液中9种酪氨酸激酶类药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方法.
本文件适用于人体血液中替万替尼，LY2157299，索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼，卡博替尼，安 罗替尼，阿帕替尼和吉非替尼含量的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.
3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 样品用甲醇提取，提取液加入无水硫酸镁盐析后，用N-丙基乙二胺（PSA）吸附净化，液相色谱- 质谱/质谱法测定，内标法定量.
5试剂和材料 5.1试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1.1 甲醇：色谱纯.
5.1.2 乙酸乙酯：色谱纯.
5.1.3 丙酮：色谱纯.
5.1.4甲酸：色谱纯.
T/HBIQA 00062024 5.1.5乙酸：色谱纯.
5.1.6乙晴：色谱纯.
5.1.7无水硫酸镁.
5.1.8N-丙基乙二胺（PSA）， 5.1.9标准品：替万替尼（CAS号：1000873-98-2）、LY2157299（CAS号：700874-72-2）、索拉非 尼（CAS号：284461-73-0），伦伐替尼（CAS号：417716-92-8），瑞戈非尼（CAS号：755037-03-7）， 卡博替尼（CAS号：1140909-48-3），安罗替尼（CAS号：1058156-90-3），阿帕替尼（CAS： 41567-78-6），吉非替尼（CAS号：184475-35-2）和普萘洛尔（CAS号：525-66-6）纯度均≥98%.
5.1.10混合标准储备溶液的配制：分别称取替万替尼，LY2157299，索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼， 卡博替尼，安罗替尼，阿帕替尼和吉非替尼1mg（精确到0.01mg），置10mL量瓶中，用甲醇 溶解并定容至刻度，分别配制成替万替尼，LY2157299，索拉非尼，伦伐替尼，瑞戈非尼，卡 博替尼，安罗替尼，阿帕替尼和吉非替尼的储备溶液，于-20℃保存至分析.
5.1.11标准中间溶液的配制：取500μL标准储备溶液（5.1.10）至50mL量瓶中，加甲醇稀释，混匀， 得到1μg/mL的标准中间溶液于-20C保存备用.
5.1.12内标储备液的配制：称取1mg（精确到0.01mg）普萘洛尔，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并 定容至刻度，得到0.1mg/mL的内标储备液，于-20C保存至分析.
5.1.130.1%（体积分数）甲酸水溶液：准确移取甲酸1.0mL置于1L量瓶中，用水定容，混匀.
6仪器设备 6.1液相色诺-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）.
6.2氮吹浓缩仪.
6.3涡旋震荡仪.
6.4电子分析天平（精度0.01mg）.
6.5高速冷冻离心机（最高转速22000rpm）.
7试样制备 全部血液样本充分混匀后，在4C、3000r/min条件下离心10min，取管内上清液分装，-80°C储存 待测.
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T/HBIQA 0006-2024 8 8.1试样预处理 取200gL血液试样（7）加入5mL离心管中，加入1.5mL乙晴进行提取，并涡族混匀30s.
然后， 分别加入350mg MgSO4和40mg PSA进行盐析和净化.
涡旋30 s后，12000 r/min离心10 min，取上清液1 mL，经0.22um微孔膜过滤后移入离心管，室温下氮气吹干，加入200gL含有内标的甲醇溶液作为复溶 溶剂，待测定.
8.2标准曲线 取相应的空白样品，按照7步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将混合标准储备溶液逐级稀 释，得到伦伐替尼，索拉非尼，卡博替尼，阿帕替尼，吉非替尼，瑞戈拉非尼，安罗替尼：0.1、0.2、 0.5、1、2、5、8和10 ng/mL;替万替尼和LY2157299:1、2、3、10、20、50、80和100 ng/mL的 系列混合标准工作溶液（内标普萘洛尔的浓度为100ng/mL），浓度由低到高进行检测，以分析物与内 标定量离子的峰面积比值对质量浓度作图，做出内标标准曲线回归方程.
8.3仪器参考条件 8.3.1液相色谱参考条件 a.色谱柱：Hypersil GOLD VANQUISH C18（100×2.1 mm，1.9 μm），或相当者.
b.流动相：A相为乙腊：B相为0.1%甲酸水溶液.
c.柱温：40℃.
d.进样体积：5uL.
e.流速：0.3mL/min.梯度洗脱程序见表1： 表1梯度程序洗脱表 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 15 85 0.5 15 85 2 95 5 6 95 5 7 15 85 8 15 85 9 70 30 8.3.2质谱参考条件 a.电离方式：电喷雾电离，正离子扫描模式.
