ICS 01. 040. 11 CCS C10/29 T/HBIQA 河北省检验检疫学会团体标准 T/HB1QA 0009-2024 人体血液中7种多激酶类药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 Determination of seven polykinases in human blood by HPLC-MS/MS 2024-08-15发布 2024-10-15实施 河北省检验检疫学会发布
T/HBIQA 00092024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草.
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本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由河北省检验检疫学会提出并归口.
本文件起草单位：河北省药品医疗器械检验研究院、河北医科大学药学院.
本文件主要起草人：李挥、梁艳、宋莉、李怡霖、刘亚楠.
T/HBIQA 0009-2024 人体血液中7种多激酶类药物含量的测定 高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了人体血液中7种多激酶类药物含量的高效液相色谱-串联质谱检测方法.
本文件适用于人体血液中索拉菲尼、阿西替尼、埃罗替尼、西地尼布、布立尼布、利尼伐尼、 戈伐替尼含量的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.
3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 样品经甲醇提取、无水硫酸镁盐析、N-丙基乙二胺（PSA）净化后，涡旋混匀、冷冻离心、 氮吹复溶，进行液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量.
5试剂和材料 5.1试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1.1甲醇：色谱纯.
5.1.2 甲酸：色谱纯.
5.1.3 无水硫酸镁.
5.1.4N-丙基乙二胺（PSA）.
T/HBIQA 0009-2024 5.1.5标准品：索拉菲尼（CAS号：475207-59-1），阿西替尼（CAS号：319460-85-0），埃 罗替尼（CAS号：183321-74-6），西地尼布（CAS号：288383-20-0），布立尼布（CAS 号：649735-46-6），利尼伐尼（CAS号：796967-16-3）和戈伐替尼（CAS号：928037-13-2） 的纯度均大于等于98%. 5.1.6混合标准储备溶液的配制：分别称取布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐 替尼、埃罗替尼、西地尼布1mg（精确到0.01mg），置10mL量瓶中，用甲醇溶解并 定容至刻度，分别配制成布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐替尼、埃罗 替尼、西地尼布的储备溶液，于-20℃保存至分析.
5.1.7内标储备液的配制：称取1mg（精确到0.01mg）多韦替尼，置10mL量瓶中，用甲醇 溶解并定容至刻度，得到0.1mg/mL的内标储备液，于-20C保存至分析.
5.1.8标准中间溶液的配制：取500L标准储备溶液（5.1.6）至50mL量瓶中，加甲醇稀释， 涡旋混匀，得到1ug/mL的标准中间溶液，于-20C保存备用.
5.1.90.1%（体积分数）甲酸水溶液：准确移取甲酸1.0mL置于1L量瓶中，用水定容至刻度， 混匀.
6仪器设备 6.1液相色语-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）.
6.2氮吹浓缩仪.
6.3涡旋振荡器.
6.4电子分析天平（精度0.01mg).
6.5高速冷冻离心机（最高转速22000rpm）.
7试样制备 全部血液样本充分混匀后，在4C、3000r/min条件下离心10min，取管内上清液分装，-80°℃ 储存待测.
8 8.1试样预处理 取200gL血液试样（7）于5mL离心管中，准确加入1.0mL甲醇、250mg无水MgSO
T/HBIQA 0009-2024 35mgPSA进行盐析和净化，涡旋混匀30s后，经12000r/min，4°C冷冻离心10min.
上清液全 部取出，氮吹浓缩至干，用300uL含有内标的甲醇复溶，涡旋混匀30s，过0.22μum微孔滤膜， 待测定.
8.2标准曲线 取相应的空白样品，按照7步骤进行处理，用得到的空白样品提取液，将混合标准储备溶液 逐级稀释，得到布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐替尼浓度为5、10、25、50、 100、250、400和500ng/mL，埃罗替尼、西地尼布浓度为10、20、50、100、200、500、800、 和1000ng/mL的系列混合标准工作溶液（内标多韦替尼的浓度为100ng/mL），浓度由低到高 进行检测，以分析物与内标定量离子的峰面积比值对质量浓度作图，做出内标标准曲线回归方程.
8.3仪器参考条件 8.3.1液相色谱参考条件 a.色谱柱：Zorbax RRHD Stablebond Aq（50 ×2.1 mm，1.8 μum），或相当者.
b.流动相：A相为0.1%甲酸溶液：B相甲醇.
c.柱温：40C.
d.进样体积：5pL. e.流速：0.3mL/min.
梯度洗脱程序见表1： 表1梯度洗脱程序表 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 1 30 2 50 50 2.5 0 100 3 0 100 3.1 30 5 70 30 8.3.2质谱参考条件 a电离方式：电喷雾电离，正离子模式.
b.电喷雾电压：3500V. c.鞘气流速：50Arb.
d.辅助气流速：10Arb.
