ICS 67. 050 CCS X 04 T/HBIQA 河北省检验检疫学会团体标准 T/HBIQA 0011-2024 中兽药中非法添加药物恩诺沙星快速检测 表面增强拉曼光谱法 Rapid detection of illegally enrofloxacin in Chinese veterinary medicine Surface enhanced Raman spectroscopy method 2024-08-15发布 2024-10-15实施 河北省检验检疫学会发布
T/HBIQA 0011-2024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.
本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由河北省检验检疫学会提出并归口.
本文件起草单位：石家庄海关技术中心、厦门市普识纳米科技有限公司.
本文件主要起草人：艾连峰、曾勇明、杨欣羽、张若愚、王敬、张海超、李珊.
T/HBIQA 0011-2024 中兽药中非法添加药物恩诺沙星快速检测 表面增强拉曼光谱法 1范围 本文件规定了中兽药中恩诺沙星的表面增强拉曼光谱快速检测方法.
本文件适用于中兽制剂中恩诺沙星成分的快速检测.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.
3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 不同物质具有与其分子结构相对应的特征拉曼光谱.
一般样品经稀释，复杂样品经液液萃取，加表 面增强试剂对信号增强，进行拉曼光谱扫描.
与标准谱图库中的恩诺沙星特征拉曼位移（1080±5cm， 1215±5 cm 1245±5 cm 1280±5 cm 1349±5 cm 1350±5 cm~ 1399±5 cm 1500±5 cm~ 1629±5 cm) 进行匹配识别，对样品中的恩诺沙星进行定性判定.
5试剂和材料 5.1试剂 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1.1甲酸，色谱纯.
T/HBIQA 0011-2024 5.1.2甲醇，色谱纯.
5.1.3乙睛，色谱纯.
5.1.4氯化钠.
5.1.5N-丙基乙二胺吸附剂（PSA）.
5.1.6石墨化碳（GCB）.
5.1.7净化管：2mL离心管装有0.12gN-丙基乙二胺固相吸附剂（PSA）0.05g石墨化碳黑（GCB）.
5.1.8促凝剂：1mol/L的氯化钠，称取氯化钠固体0.585g，加水定容至10mL.
5.1.9甲酸-甲醇溶液：20mL甲醇加入1mL甲酸混合均匀.
5.1.10表面增强试剂：纳米金溶胶或相当者.
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注：表面增强试剂的参考配制方法：纳米金溶胶：取10mL0.2mol/L氯金酸（AuCls-HCI-4H;O）水溶液加热至沸， 剧烈摸拌下准确加入0.2mL1%抗坏血酸（CH;Og），金黄色的氯金酸水溶液在1min内变为红色，冷却后加入0.05 mL浓度为1%的柠檬酸三销（Na:CsHsO）水溶液，据匀后备用，现用现配.
5.1.11恩诺沙星标准品：C1gHFN；Os，CAS号：93106-60-6，纯度≥98%.
5.1.12恩诺沙星标准溶液：准确称取标准物质0.1000g，甲醇（HPLC级）准确定容至100mL.
保证配 制样本浓度为1mg/mL，于4C避光保存，有效期1个月.
5.2材科 5.2.1塑料具塞离心管：2mL.
5.2.2移液吸头：10μL，200μL，1000μL. 5.2.3容量瓶：10mL.
6仪器设备 6.1拉曼光谱仪 稳频激光光源：发射波长为785±1nm，线宽<0.1nm，能量≥250mW：光谱分辨率≤10cm：光谱 响应范围300cm~2700cm，或大于该响应范围. T/HBIQA 0011-2024 6.2 移液器：200μL，1000μL. 6.3涡旋振荡器. 6.4离心机：最大转速≥10000r/min. 6.5电子天平：感量为0.01g和0.0001g 6.6氮吹仪. 7测定步骤 7.1提取 称取混合均匀的样品0.5g（精确到0.01g），加入1mL乙，0.1g氯化钠进行萃取，涡旋30秒，10000 r/min离心2min，取上清液加入到净化管中，涡旋1min，10000r/min离心2分钟，取上清液200gL，氮吹 至干，向其中加入200uL甲酸-甲醇溶液（5.1.9）进行复溶，待测. 7.2测定 7.2.1拉曼光谱仪器分析参考条件 激光能量≥250mW，数据采集时间≥4s. 7.2.2表面增强和测定 向检测瓶中依次加入200μL表面增强试剂（5.1.10），100μL待测液，100gL促凝剂（5.1.8），混 匀后立即置于检测池中检测. 7.3质控试验 每批样品应同时进行阴性对照和阳性对照试验. 7.3.1阴性对照 称取空白试样，按照7.1和7.2步骤与样品同法操作. 7.3.2阳性对照 准确称取空白试样20g置于15mL具塞离心管中，加入100gL恩诺沙星标准溶液，使待测样本浓 度为20mg/kg，按照7.1和7.2步骤与样品同法操作.