ICS11. 020 CCS C61 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T10018-2024 利什曼原虫检测涂片镜检法 Leishmania detectionSmear microscopy 2024-10-11发布 2025-03-01实施 国家疾病预防控制局 发布
WS/T10018-2024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草.
本文件由国家疾病预防控制标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出，国家疾病预防控制局归口.
本文件起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所（国家热带病研究中心）、首都医科 大学附属北京友谊医院、四川省疾病预防控制中心、浙江省疾病预防控制中心、上海交通大学医学院附 属瑞金医院.
本文件主要起草人：高春花、郑彬、汪俊云、邹洋、刘阳、姚立农、王剑飚、危芙蓉、俞航.
WS/T 10018-2024 利什曼原虫检测涂片镜检法 1范围 本文件描述了骨髓和皮肤组织液涂片镜检法检测利什曼原虫的检测方法.
本文件适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体利什曼原虫的显微镜检测.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
WS233病原微生物实验室生物安全通用准则 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件.
3. 1 利什曼原虫Leishmaniaspp. 一类可以引起利什曼病的寄生性的单细胞真核生物.
不同种利什曼原虫感染可导致人内脏利什曼病 （visceral leishmaniasis）或称黑热病（kala-azar）、皮肤利什曼病（cutaneous leishmaniasis） 或黏膜皮肤利什曼病（mucocutaneous leishmaniasis）.
3. 2 利什曼原虫无鞭毛体Leishmaniaamastigote 寄生于人体和哺乳动物单核巨噬细胞内的利什曼原虫，其鞭毛萎缩而不可见，虫体呈圆形或卵圆形， 无运动能力.
3.3 骨髓涂片bonemarrowsmear 骨髓穿刺液涂于载玻片上制成的涂片.
3. 4 皮肤组织液涂片dermaltissuefluidsmear 皮肤组织液涂于载玻片上制成的涂片.
4仪器设备 4.1光学显微镜（100×油浸物镜、10×目镜）.
4.2涂片染色架.
4.3涂片干燥架.
4.4染色盘.
4.5医疗污物桶.
5试剂或材料 5.1吉氏粉.
5.2瑞氏粉.
5.3pH7.2磷酸盐缓冲液（phosphate buffer saline，PBS）.
WS/T 10018-2024 5.4甲醇（分析纯）.
5.5专用浸油或香柏油（折射率≥1.5）.
5.6二甲苯（分析纯）.
5.7载玻片（无划痕无油污的洁净载玻片）.
6检测步骤 6.1涂片的制作 6.1.1编号 取3张洁净载玻片，分别在每张玻片一侧标注编号.
6.1.2骨髓涂片的制作 对于疑似内脏利什曼病患者，采用骨髓穿刺方法采集骨髓.
立即在距离每张载玻片编号端1/3处滴 加约20L骨髓穿刺液，另取1张边缘光滑的载玻片作为推片，将推片下缘平抵骨髓穿刺液前侧，当骨髓 穿刺液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使2张玻片保持25°～35”角，从编号端向另一端 迅速推成舌状涂片（见附录A）.
室温干燥.
6.1.3皮肤组织液涂片的制作 对于疑似皮肤利什曼病患者，在皮肤结节边缘或者皮肤溃疡处吸取或刮取组织液，置于载玻片上（每 张载玻片5uL～20uL），按上述方法制作涂片.
室温干燥.
6.2染色液的配制 6.2.1吉氏染液的配制（见附录B）. 6.2.2瑞氏染液的配制（见附录B） 6.3涂片染色 用吉氏染液或瑞氏染液染色，染色方法和涂片保存见附录C.
6.4镜检 在染色晾干后的涂片上加1滴专用浸油或香柏油，在光学显微镜（100×油浸物镜、10×目镜）下检 查.
7结果判定 7.1利什曼原虫检测阳性 涂片中查到利什曼原虫无鞭毛体，该涂片判定为阳性（见附录D）.
7.2利什曼原虫检测阴性 观察1000个以上视野而没有发现利什曼原虫无鞭毛体，该涂片判定为阴性.
8废弃物处理 样品、洗涤液和各种废弃物均应按照WS233病原微生物实验室生物安全通用准则的规定进行处 理.
WS/T 10018-2024 附录A （资料性） 涂片的制作方法示意图 骨髓和皮肤组织液涂片制作示意图见图A.1.
1.在玻片一侧编号.
2.在距离玻片编号端1/3 处滴加约20ul骨髓穿刺液 或5ul~20μl皮肤组织液， 推片下缘平抵液滴前侧.
25°~35°角 3.当液滴在两张玻片间 扩展至约2cm时，使两张 玻片保持25°~35°角.
4.将推片迅速从编号端向 另一端推进.
5.涂片可分为头、体、尾 三部分，在尾部舌状区域 易检出利什曼原虫无鞭毛体.
图A.1涂片制作示意图