ICS07.060;13.020 CCS Z19 HY 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T0319-2021 贝类 脂溶性海洋生物毒素的检测 液相色谱-串联质谱法 ShellfishDetermination of lipophilic marine biotoxins LC-MS/MSmethod 2021-07-02发布 2021-11-01实施 中华人民共和国自然资源部 发布
HY/T 0319-2021 目次 前言 1范围 2规范性引用文件 3原理. 4试剂和材料 5仪器设备 6样品 7试验步骤 8结果计算与表述 9精密度 10其... 附录A（资料性） 脂溶性海洋生物毒素 附录B（资料性） 特征离子质量色谱图 附录C（规范性） 脂溶性海洋生物毒素的毒性因子 10 参考文献 11
HY/T0319-2021 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
本文件由中华人民共和国自然资源部提出.
本文件由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口.
本文件起草单位：国家海洋环境监测中心、中国科学院海洋研究所、厦门大学、中国水产科学研究院 黄海研究所.
本文件主要起草人：许道艳、梁玉波、刘仁沿、刘磊、陈猛、于仁诚、潭志军、高春蕾、续彦龙.
HY/T 0319-2021 贝类脂溶性海洋生物毒素的检测 液相色谱-串联质谱法 警示一为避免毒素的危害，应戴手套进行操作，移液管及移液器吸头等用过的器材、废弃的提取 液等应在次氯酸钠溶液（5%）浸泡1h以上以使毒素分解. 1范围 本文件规定了贝类脂溶性海洋生物毒素大田软海绵酸、鳍藻毒素、蛤毒素、虾夷扇贝毒素、原多甲藻 本文件适用于贝类体中脂溶性海洋生物毒素的检测.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法.
3原理 贝类样品经甲醇提取，碱性条件下水解释放酯化态生物毒素部分，用HLB固相萃取柱净化，液相 色谱分离，串联质谱测定，外标曲线法定量.
4试剂和材料 4.1乙晴（CHCN）：色谱纯.
4.2甲醇（CHOH）：色谱纯.
4.3甲酸（HCOOH) 4.4甲酸铵（HCOONH）. 4.5氨水（NHHO）：浓度≥25%.
4.6氢氧化钠（NaOH）. 4.7盐酸（HCL)：浓度≥36%. 4.8氢氧化钠溶液（2.5mol/L）：准确称取50g氢氧化钠，用水定容至500mL，室温保存.
4.9盐酸溶液（2.5mol/L)：准确量取104.5mL盐酸，用水定容至500mL，室温保存.
4.10甲醇溶液（30%）：量取30mL甲醇加到70mL水中，混合均匀，室温，现用现配.
4.11甲醇溶液（20%）：量取20mL甲醇加到80mL水中，混合均匀，室温，现用现配.
4.12氨水甲醇溶液（0.3%）：吸取0.3mL氨水，用甲醇定容至100mL，室温，现用现配.
4.13脂溶性海洋生物毒素标准（见附录A）溶液：OA、DTX1、DTX2、PTX2、YTX、homoYTX、AZA1、 AZA2、AZA3、GYM、SPX1标准物质纯度≥97%，避光保存于-20C.
HY/T 0319-2021 4.14脂溶性海洋生物毒素标准储备液：分别吸取适量的各脂溶性海洋生物毒素标准溶液（见4.13），甲 醇（见4.2）配制储备溶液.
0.22μm滤膜（见5.12）过滤，-20C避光保存备用.各脂溶性海洋生物毒 素标准储备液浓度分别为：OA 40ng/mL，DTX140ng/mL，DTX240ng/mL，YTX400ng/mL，ho- moYTX 400 ng/mL PTX2 1 000 ng/mL SPX1 200 ng/mL GYM 10 ng/mL AZA1 200 ng/mL AZA2 100 ng/mL AZA3 100 ng/mL.
4.15脂溶性海洋生物毒素混合标准工作溶液：分别吸取适量的各脂溶海洋生物毒素标准储备溶液（见 4.13），甲醇（见4.2）配制正离子混合标准工作溶液（PTX2、AZA1、AZA2、AZA3、GYM、SPX1）和负离子 混合标准工作溶液（OA、DTX1、DTX2、YTX、homoYTX）.
0.22μm滤膜（见5.12）过滤，-20C避光 保存备用，各脂溶性海洋生物毒素的浓度见表1.
注：除非另有说明，以上所用试剂均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水.
表1脂溶性海洋生物毒素标准工作溶液 浓度单位为纳克每毫升 组别 毒素简称 浓度1 浓度2 浓度3 浓度4 浓度5 PTX2 500 250 125 62 5 31.25 AZA1 100 50 25 12.5 6.26 AZA2 50 25 12.5 6.25 3.125 正离子 AZA3 50 25 12.5 6.25 3 125 GYM 5 2.5 1.25 0.625 0.312 5 SPX1 100 50 25 12.5 6.26 VO 20 10 5 2.5 1.25 DTX1 20 10 5 2.5 1.25 负离子 DTX2 20 10 5 2.5 1.25 YTX 200 100 50 25 12.5 homoYTX 200 100 os 25 12.5 5仪器设备 5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI).
5.2分析天平：感量0.00001g.
5.3天平：感量0.01g.
5.4匀质机.
5.5涡振荡器.
5.6离心机.
5.7水浴锅.
5.8固相萃取装置.
5.9真空泵.
5.10pH计.
5.11固相萃取柱：基质为含有N-乙烯吡略烷酮聚合物的吸附剂，填料质量为30mg，体积为1mL，或 者相当.
5.120.22μm滤膜.
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