ICS07.060;13.060 Z17 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T153-2013 海水、沉积物中致突变性的测定 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验 Detectionofmutagenecityinseawater andsedimentsamplebySalmonella typhimurium/mammalsmicrosomalenzymetest(Amestest) 2013-04-25发布 2013-05-01实施 国家海洋局 发布
HY/T 153-2013 目次 前言 1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4方法原理 5仪器设备 6试剂和材料 菌株选择、鉴定和保存 样品采集和保存 9 分析步骤 10结果判定. 11结果计算 附录A（规范性附录） 菌株生物学特性鉴定标准及标准诊断性诱变剂 参考文献 8 表A.1菌株生物学特性鉴定标准结果 表A.2标准诱变剂测定结果及表示方法 表A.3推荐用标准诱变剂
HY/T153-2013 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家海洋局东海环境监测中心提出.
本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口.
本标准起草单位：国家海洋局东海环境监测中心、国家海洋局东海标准计量中心.
本标准主要起草人：王金辉、刘材材、徐韧、程祥圣、邬益川、邬建勇、张勇、项凌云、陈东.
HY/T153-2013 海水、沉积物中致突变性的测定 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验 1范围 本标准规定了海水和沉积物中致突变性测定所需的样品采集、处理、试验、分析、计算等的技术 要求.
本标准适用于海水和沉积物的致突变性的测定.
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB15193.4-2003鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验 GB17378.5海洋监测规范第5部分：沉积物分析 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件.
3.1 回复突变reversemntation 细菌在化学突变物作用下由营养缺陷型回变到野生型.
3.2 鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验Salmonellatyphimuriumreversemutationtest 利用一组鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型试验菌株测定引起沙门氏菌碱基对置换或移码突变的化学物 质所诱发的组氨酸缺陷型回复突变到野生型的试验方法.
4方法原理 人工诱变鼠伤寒沙门氏菌的突变型（即组氨酸缺陷型）菌株在无组氨酸的培养基上不能生长，在有 组氨酸的培养基上可以正常生长.
但如在无组氨酸的培养基中有致突变物存在时，则沙门氏菌突变型 可回复突变为野生型（表现型），因而在无组氨酸培养基上也能生长，故可根据菌落形成数量，检查受试 物是否为致突变物.
某些致突变物需要代谢活化后才能使沙门氏菌突变型产生回复突变，代谢活化系 统可以用多氯联苯（PCB)诱导的大鼠肝匀浆（S-9）制备的S-9混合液.
使用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物 微粒体酶试验检测海水或沉积物的致突变性.
5仪器设备 本试验应包括以下仪器设备：
HY/T153-2013 a）低温高速离心机：温度4C，转速12000r/min； b）超低温冰箱：一80C，或液氮罐； c）洁净工作台； d）恒温震荡培养箱：37C±1℃； e）恒温水浴锅：40C士1℃； f）蒸汽压力锅：121C士1℃； g）K-D浓缩器； h）匀浆器； i）氮吹仪； j）蒸馏回流装置； k）聚乙烯、聚四氟乙烯或其他情性材质密闭容器：25L； 1）采泥器； m）培养Ⅲ：直径90mm； n）其他实验室常用设备.
6试剂和材料 营养肉汤培养基、营养肉汤琼脂培养基、底层培养基、顶层培养基、0.8%氨苄青霉素溶液、0.1%结 青霉素-四环素平板培养基、组氨酸-生物素平板培养基、二甲基亚矾（DMSO）（光谐纯）、S-9辅助因子 （混合液试剂）、10%S-9混合液、活化系统（S-9或S-9混合液）的制备按GB15193.4-2003中第4章的 要求执行.
除非另作说明，所用试剂均为分析纯，培养基成分无诱变性，水为蒸馏水或等效纯水.
所用试剂应 避免高温处理.
7菌株选择、鉴定和保存 7.1菌株选择 采用两株鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株TA98、TA100.
TA98可检测各种移码型诱变剂；TA100可 检测引起碱基对置换的诱变剂.
7.2菌株鉴定 7.2.1菌株鉴定要求 菌株特性应与鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验标准相符（见附录A中表A.1）.
突变型菌 的某些特性易丢失或变异，遇到下列情况应鉴定菌株的基因型： a）在收到培养菌株后； b）当制备一套新的冷冻保存株或冰冻下燥菌株时； e）当每Ⅲ自发回复突变菌落数超出表A.1所规定的正常范围时； d）当对标准诱变剂丧失敏感性时； e）使用主平板传代时； f）投入使用前.
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