ICS07.060:13.020 Z19 HY 中华人民共和国海洋行业标准 HY/T216-2017 河豚毒素检测方法 Determinationoftetrodotoxin 2017-02-21发布 2017-06-01实施 国家海洋局 发布
HY/T 216-2017 目次 前言 川 1范围 2规范性引用文件 3术语和定义 4原理 5试剂 6仪器与设备 7样品的制备和保存 8样品测定 9结果的表示与计算 10精密度 11实验注意事项 附录A（资料性附录） 河豚毒素标准样品及阳性样品的高效液相色谱图 附录B（资料性附录） 河豚毒素标准溶液的标准曲线图 附录C（资料性附录） 回收率数据 附录D（资料性附录）再现性数据
HY/T216-2017 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家海洋局第三海洋研究所提出.
本标准由全国海洋标准化技术委员会（SAC/TC283）归口. 本标准起草单位：国家海洋局第三海洋研究所、国家海洋局海洋标准计量中心.
本标准主要起草人：陈伟珠、易瑞灶、袁玲玲、洪碧红、张怡评、洪专、晋文慧.
HY/T216-2017 河豚毒素检测方法 警告一由于河豚毒素是剧毒的固体粉末，因此使用时应戴口罩和手套，注意避免吸入，配成溶液 时避免与人体直接接触.
若不慎接触到皮肤或眼部，应用大量水冲洗.
严重时，立即送及 医院.
1范围 本标准规定了贝类、鱼类中（不含其制品）河豚毒素的高效液相色谱荧光检测法.
本标准适用于员类、鱼类中（不含其制品）河豚毒素的测定， 本标准对河豚毒索的检出限为0.1mg/kg，定量限为0.25mg/kg. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复 性与再现性的基本方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件.
3.1 河豚毒素tetrodotoxin；TTX 某些鲍科鱼类（如东方纯）体内所含的外源神经毒索，以血液和内脏器官的含量最多.
小剂量有麻 痹和镇痛作用，剂量稍大便可致死人命，结构式如下： 0 HO HN: 11 HO CH OH OH 4原理 利用河豚毒素溶于弱酸的性质进行提取，河豚毒素在强碱中可产生具有荧光性衍生物原理，采用柱 后衍生-高效液相色谱荧光法进行检测，根据保留时间定性分析，峰面积定量分析.
5试剂 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和超纯水或相当纯度的水.
HY/T 216-2017 5.1辛烷磺酸钠（CHNaO S）.色谱纯.
5.2二水合磷酸二氢钠（NaHPO 2HO）. 5.3十二水合磷酸氢二钠（NaHPO12HO）.
5.4氢氧化钠（NaOH）. 5.5乙酸（CHCOOH)，色谱纯.
5.6辛烷磺酸钠的磷酸盐缓冲液：取辛烷磺酸钠（5.1）0.540g、二水合磷酸二氢钠（5.2）3.900g和十二 水合磷酸氢二钠（5.3）8.954g，加水稀释定容至500mL，配置成辛烷磺酸钠浓度为1.080g/L，二水合磷 酸二氢钠浓度为7.800g/L，十二水合磷酸氢二钠浓度为17.908g/L的混合溶液，经0.45μm微孔滤膜 过滤.
5.7氢氧化钠溶液；称取160g氢氧化钠（5.4），以水溶解并稀释至1L，浓度为4mol/L，经0.45μm微 孔滤膜过滤.
5.80.1%乙酸溶液：乙酸（5.5）水（11000，体积比），用玻璃瓶贮存，室温保存.
5.90.03%乙酸溶液：乙酸（5.5）水（3十10000，体积比），用玻璃瓶贮存，现用现配.
5.10标准储备液：称取河豚毒素标准样品10mg（精确至0.01mg），置于100mL容量瓶中，加0.03% 乙酸溶液（5.9）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，其浓度为0.100mg/mL，标准储备液贮存于玻璃 容器中，在4C士2C保存时，储备液可保存一个月.
6收器与设备 6.1组织匀浆器.
6.2数显控湿搅拌器.
6.3高速离心机，转速不小于12000r/min， 6.4液相色谱仅配荧光检测器和柱后衍生装置.
6.5微孔滤膜：0.45μm， 6.6分析天平，感量：0.01mg.
6.7分析天平，感量：0.001g.
6.8水浴锅， 7样品的制备和保存 7.1样品的保存与预处理 新鲜贝类样品清洗沥干去壳，新鲜鱼类样品清洗后去皮取鱼肉，未能及时处理的样品应于一20C 保存，预处理前自然解冻.
7.2样品的提取 样品按以下步骤进行提取： a）取预处理后的样品（7.1），用组织匀浆器磨成状； b）称取5.0g（精确至0.001g）样品于烧杯中，加10mL0.1%乙酸溶液（5.8），在50C水浴中搅拌 加热10min，全部移至离心管中； e）再用5mL0.1%乙酸溶液（5.8）洗涤烧杯，并转移到离心管，以12000r/min转速离心20min 后，取上清液转移到50mL容量瓶中； d）再分别用10mL0.1%乙酸溶液（5.8）洗涤沉淀3次，离心后转移至50mL容量瓶中.用0.03% 乙酸溶液（5.9）定容， 2
