ICS 65.150 B 51 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T2047-2006 水产养殖用海洋微藻保种 操作技术规范 Technical specification for germplasm grade andpreservation ofmarine microalgae using in aquaculture 2006-07-10发布 2006-10-01实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T2047-2006 前言 本标准的附录A、D、E是规范性的，其余是资料性的.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准由全国水产养殖标准化技术委员会海水养殖分技术委员会归口.
本标准起草单位：苏州大学、江苏省海洋水产研究所.
本标准主要起草人：陈葵、陈淑吟、吉红九、沈颂东、贺丽红.
SC/T2047-2006 水产养殖用海洋微藻保种 操作技术规范 1范围 本标准给出了水产养殖中常用海洋微藻保种的术语和定义、设施设备和条件、基本操作与日常管 理、藻种来源和分离纯化、藻种保存培养、室内小型扩增培养及藻种种质库的建立与管理方法.
本标准适用于附录A所列水产养殖用海洋微藻的保种.
其他海洋浮游微藻可参照执行.
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB11607渔业水质标准 3术语和定义 3.1 水产养殖用海洋微藻marinemicroalgaeusingin aquaculture 用于水产养殖动物苗种培育、动物性饵料生物、经济双壳类成体的饵料、净化水质的海洋单细胞藻 类，水产养殖常用海洋微藻种类参见附录A.
3.2 藻种microalgae species 具有良好特征性状，新鲜无污染，细胞密度在10²个/mL~10”个/mL之间的微藻单种或纯种.
3.3 接种inoculation 在无污染的条件下，把选中的藻种放人新备好的培养基中的操作.
3.4 单种培养xenicculture 培养过程中，海洋微藻的培养系统内含有细菌（或不含细菌）和要培养的海洋微藻而没有其他生物.
3.5 封闭式培养closedculture 藻类培养在封闭的容器中，只通过充气管、培养液加人管和藻液抽出管与外界接触.
3.6 一次性培养batchculture 指在有限容积的培养容器中，加人定量培养液，接入种，藻细胞生长繁殖达到较高密度时，不加人 或不更换培养液，一次性全部收获的培养方式.
3.7 半连续培养semi-continuousculture 指在一次性培养的基础上，藻细胞生长繁殖达到较高密度时，收获部分藻液，置换等量的培养液，再 1
SC/T 2047-2006 培养再收获的培养方式.
3.8 连续培养continuousculture 指使用封闭式自动培养装置，当培养容器中藻细胞密度超过规定数值，藻液自动流出，新培养液同 时流人，自动化仪器不断调整流出率，保持藻液细胞密度相对稳定的培养方式.
3.9 继代培养subculture 间后，再放人低温（5C～8C）、弱光（50lx~2001x）条件下，一代一代培养下去的方法，接种一次可保藏 3个月~12个月.
4设施设备和条件 4.1水质 符合GB11607.
4.2设施设备 4.2.1海水处理设施 室外蓄水池、沉淀池、暗沉淀池或砂滤设备、通人室内的输水管道.
4.2.2清洗消毒间 用于容器和器材的清洗消毒，可分清洗间与消毒间.
配有清洗消毒水槽、不同规格玻璃器皿、玻璃 器皿放置架、臭氧紫外线消毒柜、烘箱、紫外线灯、工作台、电炉或煤气灶，高压蒸汽灭菌锅及载物架等.
4.2.3培养操作间 进行培养液的配制及微藻的保种、培养及检查等操作的房间.
配有pH计、分光光度计、化学试剂、 药品柜、电子天平、光学显微镜、超净工作台、无菌室等.
4.2.4保种间 用于放置低温培养箱、恒温光照培养箱、冰箱、冰柜，保存藻种、存放浓缩藻液的房间.
4.2.5小型扩增培养间 进行微藻小型扩增培养的具有控温设施的房间.
要求房间采光、通风良好.
配置气泵、带人工光源 的培养架、遮光帘等.
5消毒灭菌和营养液配制 5.1消毒 5.1.1微藻分离、保存用的海水在使用前需经灭菌处理.
一般煮沸5min～10min，用保鲜膜封口，冷 却至室温后备用.
5.1.2玻璃器血用洗液或稀盐酸泡洗5min～10min，再用清水冲净，倒置凉干，放人烘箱，120℃～ 160℃灭菌1h~2h.
5.1.3有培养基的器Ⅲ先去掉培养基再按5.1.2的要求洗涤.
5.1.4其他不易清洗的容器，先刷洗干净，再按5.1.2的要求冲洗.
5.1.5不能用烘箱烘干的器具放于消毒柜消毒或用煮沸的方法处理.
5.2培养液配制 5.2.1总要求 一用蒸馏水或消毒海水配制； 2
SC/T 2047-2006 各种营养成分应进行无菌处理； 试剂质量应达到或高于化学纯； -微量元素、维生素，按比例配成1000倍浓度的母液； 一大量元素（包括有N、P、Fe、Si等）营养盐单独配制成1000倍浓度的母液； 母液保存于4C冰箱中备用； 一母液使用前必须摇匀，出现沉淀或被污染应弃之另配.
5.2.2常用培养液配方 各种常用微藻培养液的配方见附录B.
5.2.3培养液配制 -各成分加人顺序为N、P、Si、Fe、EDTA-Nag、V等.
一-每加人一种成分应搅均后再加人另一种.
一微种保存时所用培养液中最后可加人适量抗生素.
6藻种来源和分离纯化 6.1来源 6.1.1野外采集 在要采集藻类的生长季节、地区，采集有需分离藻种的水样，并记录采集地的理化条件.
野外采集 的水样须经过分离纯化、鉴定后保种.
6.1.2引进 从有资质的其他海洋微藻保种单位引进海洋微藻藻种.
6.2分离预备培养 根据要分离的藻类的要求，调节温度、光照度、盐度、酸碱度等，将要分离的藻类富集培养至可进行 分离的细胞密度.
主要的微藻种类适宜生长条件见附录D.
6.3分离 6.3.1微吸管分离 适于分离个体较大的藻种.
用玻璃微吸管吸取单个的所要的藻细胞后移人准备好的容器中培养.
6.3.2水滴分离 适用于在培养液中已占优势的藻种分离.
把水体稀释到每一水滴只有一个藻细胞，吸出水滴在显 微镜下检查到有需要的藻细胞时，将水滴冲人试管培养.
6.3.3平板培养分离 适用于所含藻种品种较少的水样.
把稀释适当的水样喷洒在固体培养基上，或用接种环蘸取水样 后在固体培养基上划线，然后置于适宜条件下培养来分离出藻种.
6.4纯化培养 将分离出的藻种进行单种培养，使其增殖到保种所需要的细胞密度.
6.5鉴定种类 纯化培养后的藻种经藻类分类学鉴定，确定种类.
7藻种保存培养 7.1低温保存 7.1.1条件 采用低温培养箱.
控温为5C~8C，光照度为50lx~200lx，光周期14D:10L，静置.
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