ICS 67.050 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T3018-2004 水产品中氯霉素残留量的测定 气相色谱法 Determination of chloramphenicolresidues infishery products Gaschromatography 2004-01-07发布 2004-03-01实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T3018-2004 前言 本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心.
本标准主要起草人：冷凯良、李兆新、李晓川、王联珠、霍毓秀、陈远惠.
SC/T 3018-2004 水产品中氯霉素残留量的测定气相色谱法 1范围 本标准规定了水产品中氯霉素残留量的气相色谱测定方法.
本标准适用于水产品可食部分中氯霉素残留量的检测.
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品经乙酸乙酯提取并浓缩，提取物溶于水，用正已烷脱脂，C固相萃取柱净化，硅烷化试剂衍生 化后，用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定，外标法定量.
4试剂 试剂在氯霉素出峰处应无干扰峰，最好选择优级纯或色谱纯试剂.
4.1氧霉索标准品：纯度≥99%.
4.2甲醇：色谱纯.
4.3乙酸乙酯：色谱纯.
4.4正已烷：优级纯.
4.5氯仿：分析纯.
4.6乙睛：色谱纯.
4.7无水硫酸钠：分析纯，650C灼烧4h，冷却后贮于密闭容器中备用.
4.8氯化钠：分析纯.
4.94%氯化钠溶液：称取氯化钠20g，加水溶解，稀释到500mL.
4.10氯霉素标准溶液：准确称取氯霉素标准品0.0250g，用甲醇溶解并定容至50mL，配成浓度为 500pg/mL的标准贮备液，置4C冰箱中保存，保存期不超过3个月.
临用前，取此贮备液，用甲醇稀释 成浓度为0.100pg/mL的标准工作液.
注：通常的玻璃器皿洗涤程序对于从玻璃表面除去痕量氯霉素不总是很有效的，建议使用甲醇淋洗玻璃器皿， 以避免污染问题.
4.11衍生化试剂：N.O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMCS）体积比99：1.
4.12水：实验用水应符合GB/T6682中一级水标准.
5仪器 实验室常规仪器、设备及下列各项.
5.1气相色谱仪：配Ni电子捕获检测器.
5.2电子天平：感量0.0001g.
SC/T 3018-2004 5.3均质机.
5.4离心机.
5.5旋涡混合器.
5.6电热恒温水浴钢.
5.7旋转蒸发器.
5.8鸡心瓶：50mL、100mL，细口.
5.9玻璃离心管：50mL 5.10刻度离心管：5mL，具塞.
5.11氮吹仪.
5.12Cg固相萃取柱，填料300mg.
5.13SPE固相萃取装置.
5.14无水硫酸钠柱：砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠5g.
6色谱条件 6.1色谱柱：DB-5石英毛细管柱，固定相：SE-54（聚甲基苯基乙烯基硅氧烷），30m×0.53mm×0.5 pmm；或与之相当的色谱柱.
6.2载气：氮气，线速度29cm/s.
6.3进样口温度：260℃.
6.4温度程序：初始柱温150℃，维持1min，15℃/min升至260℃，维持10min或直到氯霉素已经流 出，然后设定30C/min升至280C，维持5min，以确保的样品已经流出.
6.5检测器温度：300℃.
6.6进样方式及进样量：无分流方式进样，1pL.
6.7检测器：Ni电子捕获检测器.
7测定步骤 7.1样品预处理 鱼去鳞、皮，沿背脊取肌肉；虾去头、壳、附肢，取可食肌肉部分：蟹、中华鉴等取可食肌肉部分；样品 切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，放置冰箱中冷冻贮存备用.
7.2提取 将样品解冻，称取样品5g（精确到0.001g），置于50mL玻璃离心管中，加人乙酸乙酯20mL，均质 机均质1min，分散均匀，提取氯霉素，4000：/min离心3min，将乙酸乙酯层转移到100mL细口鸡心瓶 中.
再向离心管中加乙酸乙酯10mL，用原均质机均质混合1min，4000r/min离心3min，合并乙酸乙 酯提取液于100mL细口鸡心瓶中，于40C水浴中减压旋转蒸发至干.
注：均质机清洗方法，先用大量水浸洗，再用甲醇浸洗，最后用蒸端水浸洗.
7.3脱脂净化 向鸡心瓶中加1mL甲醇旋涡混合溶解残留物，再加入15mL正已烷和25mL4%氯化钠溶液，盖 塞振荡混合1min，充分混合提取脂肪，转移到另一50mL离心管中，4000r/min的速度离心2min，除 去上层正已烷相并弃去.
再向水相中加10mL正已烷，重复提取一遍，弃去正已烷相.
水相中加人15ml乙酸乙酯，旋涡混合器混合2min，3000r/min离心3min，吸取乙酸乙酯层，经 过无水硫酸钠柱脱水过滤于50mL鸡心瓶中.
再向水相中加人5mL乙酸乙酯，重复上述操作.
用少 量乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱，合并提取液于50mL鸡心瓶中，在40C水浴中减压旋转蒸发至干.
对 2
SC/T 3018-2004 于大部分样品，到此步骤净化效果已可达到要求，对于净化不完全的样品可经C固相萃取柱进一步净 化.
加人2mL乙酸乙酯溶解提取物并转移于5mL具塞离心管中，用1mL乙酸乙酯洗涤鸡心瓶，合并 乙酸乙酯，于50℃～55℃的砂浴中吹氮蒸发至近干，再用1mL乙酸乙酯洗涤离心管壁并吹干.
注意 防潮.
7.4C柱净化 注意：以下步骤必须连续做完，切莫让吸附剂变干.
给每个样品准备一根Cs柱，顺序用5mL甲醇、5mL氯仿、5mL甲醇和5mL水淋洗活化Cs柱，弃 掉洗涤液.
用5mL体积分数为5%的乙晴水溶液溶解7.3中在40C水浴中减压旋转蒸发至干的提取 物，吸取水溶液装人C柱过柱，弃掉流出液.
注意流速保持每秒一滴，否则净化效果和回收率都较差.
用1mL水淋洗鸡心瓶2遍，并将淋洗液加人Cs柱过柱，弃掉流出液.
用5mL水淋洗Cs柱，让洗涤液 完全流出Cs柱，用微氮吹干.
用乙請将C柱中的氯霉索洗脱，洗脱2次，每次1.5mL，合并洗脱液于 5mL具塞离心管中.
在温度50℃~55C的砂浴中，用氮气吹除乙晴至近干，再用1mL乙洗涤离心 管壁并用氮气吹干.
注意防潮.
7.5衍生化 7.5.1试样的衍生化 向干的残留物中加100gL衍生化试剂，盖塞并靛涡混合10s，在70C烘箱中反应30min.
再在 50℃～55C砂浴中，用氮气流吹除多余的试剂，至样品管刚好吹干为止（注意：此步过长的吹干时间可 导致丢失分析物）.
加入0.5mL正已烷，旋涡混合10s，供气相色谱分析用.
7.5.2标准工作液的衍生化 取适量标准工作液于5mL具塞离心管中，在温度50℃～55C的砂浴中，用氮气吹除溶剂至干.
以下按7.5.1的步骤操作.
7.6样品测定 分别注人1uL适当浓度的氯霉素标准硅烷化衍生物溶液及样品提取物硅烷化衍生物溶液于气相 色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内.
根据 标准样品的保留时间定性，外标法定量.
7.7计算 样品中氯霉素的含量按公式（1）计算.
A× m （1） 式中： X一样品中氯霉索含量，单位为微克每千克（μg/kg）； C.-标准衍生物溶液相当氯霉素含量，单位为纳克每毫升（ng/mL)； A-试样液中氯霉素衍生物的峰面积或峰高，单位为微伏秒或毫米（pVs或mm）； V-样品提取物衍生化溶液体积，单位为毫升（mL）； A -氯霉素标准衍生物的峰面积或峰高，单位为微伏秒或毫米（Vs或mm)； m-样品质量，单位为克（g）.
注：计算结果需扣除空白值.
8方法回收率 标准添加浓度为0.1pg/kg~20.0pg/kg时，回收率≥70%.
