ICS 67.050 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 3023-2004 麻痹性贝类毒素的测定 生物法 Determination of paralysis shellfish poisonBioassay 2004-01-07发布 2004-03-01实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T3023-2004 前 言 本标准参考了美国公职分析化学家协会《公定分析方法）（AOAC，1995年版）中959.08《麻痹性 贝类毒素生物法》.
本标准的附录A、附录D为资料性附录，附录B、附录C为规范性附录.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所.
本标准主要起草人：王联珠、袁骐、李晓川、陈亚瞿、冷凯良、蒋玫.
SC/T3023-2004 麻痹性贝类毒素的测定生物法 1范围 本标准规定了麻痹性贝类毒素（PSP）的测定方法一生物法.
本标准适用于软体动物贝类可食部分中麻痹性贝类毒素（PSP）的测定，其他贝类食品中PSP的测 定可参照执行.
2原理 根据小鼠注射贝类抽取液后的死亡时间，查出鼠单位，并按小鼠体重，校正鼠单位，计算确定每 100g贝肉内的PSP的含量.
所测定结果代表存在于贝肉内各种化学结构的麻痹性贝类毒素的总量.
3定义 下列定义适用于本标准.
鼠单位mouse unit MU 对体重为20g的小鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在15min时死亡所需的最低毒素量.
4试剂 4.1盐酸溶液：0.1mol/L 4.2盐酸溶液：5mol/L.
4.3氢氧化钠溶液：0.1mol/L.
4.4麻痹性贝类毒素（Saxitoxin）标准溶液：100pg/mL，经酸化，含有20%的乙醇作为保护剂，冷藏保 存，无限期稳定.
5仪器和设备 5.1均质器.
5.2天平（感量0.1g）.
5.3离心机.
5.4pH计.
5.5秒表.
5.6玻璃Ⅲ：烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等.
5.7注射器：1ml.
5.8注射器针头：8#.
5.9小鼠：体重为19g~21g的健康ICR系雄性小鼠，若体重21g，查表C.1的校正系数便 可得到实际的死亡时间，体重>23g或已用过的小鼠则不能使用.
6ICR系小鼠毒性单位的确定 6.1PSP工作标准溶液 用移液管取100pg/mLSaxitoxin标准液1mlL于100mL容量瓶中.加人用盐酸酸化至pH为3的蒸馏
SC/T3023-2004 水并定容.
该液为1pg/mLSaxitoxin标准液，pH在2.0-4.0之间.
在3t~4C条件下能稳定数周.
6.2测定用标准溶液 分别用10 mL、15mL、20 mL、25 mL和30mL水稀释10 mL浓度为1μg/mL的 Saxitoxin标准液， 稀释液的pH应为2~4.
6.3中值死亡时间的标准液选择 6.3.1将按6.2配制的各浓度的标准稀释液各1mL腹腔注射小鼠数只，选择中值死亡时间为5min～ 7min的浓度.
如某浓度稀释液已达到要求，还需以1mL水的增减量进行补充稀释试验.
例如：用25mL水稀释的10mL标准液在5min~7min杀死小鼠，还需进行24mL10mL和26 mL10mL的稀释度的试验.
6.3.2先将小鼠称重（精确到0.5g），以10个小鼠为一组.
用中值死亡时间在5min～7min内的各种 浓度的标准稀释液两份（最好是三份）注射小鼠，测定并记录每只小鼠腹腔注射完毕至停止呼吸的所需 死亡时间.
6.3.3记录注射完毕至死亡时间的最短间隔为5s，即7s记为5s，8s记为10s（见附录B）.
6.4毒素转换系数（CF）的计算 6.4.1小鼠中值死亡时间的选择 若注射某浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间7min则弃去该组结果；若注射另 一浓度标准稀释液的10只小鼠中值死亡时间在5min～7min，即使个别小鼠死亡时间7 min，也应使用该组的数据.
但是若注射某浓度标准稀释液后，10只小鼠中有3只以上存活，则要另取 10只小鼠进行重复试验.
6.4.2校正鼠单位（A） 根据注射毒素后中值死亡时间为5min～7min的10只小鼠的个别死亡时间，由附录B分别查出鼠 单位（M），再由附录C查出小鼠的重量校正因子（k），每毫升标准稀释液的校正鼠单位（A）按公式（1） 计算.
A=k× M 式中： A--校正鼠单位（MU）； M-鼠单位（MU）； k一小鼠的重量校正因子.
6.4.3毒素转换系数（F） 毒素转换系数（F）按公式（2）计算.
F=C/A (2) 式中： F--毒素转换系数； C一每毫升实际毒素含量（gSAX/mL）； A一校正鼠单位（MU）.
以此为标准做常规检测.
6.5毒素转换系数（F）值的定期检查 6.5.1如PSP检测间隔时间较长，每次测定时要用适当的标准稀释液注射5只小鼠，重新测定F值.
如果一周有几次检测，则用中值死亡时间5min～7min的标准稀释液每周检查一次，测得的F值应在 原测定F值的±20%范围内.
6.5.2若结果不符，用同样的标准稀释液另外注射5只小鼠，综合先前注射的5只小鼠结果，算出了 2
SC/T3023-2004 值.
并用同样的标准稀释液注射第二组10只小鼠，将第二组求出的了值和第一组的值进行平均，即 为一个新的F值.
6.5.3重复检查的F值通常在原结果的土20%之内，若经常发现有较大偏差，在进行常规检测前应调 查该方法中是否存在未控制或未意识到的可变因素.
7样品的测定 7.1检样的制备 7.1.1牡蛎、蛤及贻贝 用清水彻底洗净贝类外壳，切断闭壳肌，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出 贝肉，切勿割破肉体.
收集贝肉沥水5min（避免贝肉堆积），捡出碎壳等杂物，将贝肉均质.
开壳前不能 加热或用麻醉剂.
7.1.2扇贝 取可食部分（闭壳肌）用作检测.
沥干及均质过程同7.1.1的规定.
7.1.3贝类罐头 将罐内内容物（包括贝肉组织及汁液）于均质器中均质.
大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质.
7.1.4冷冻贝类 在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈半冷冻状态，按7.1.1规定的方法清洗、开壳、淋洗、取 肉、均质.
7.2提取 7.2.1取100g按7.1处理的样品于800mL烧杯中，加0.1mol/LHCl溶液100mL充分搅拌，检查 pH（pH应为2.0~4.0）.
需要时，可逐滴加人5mol/LHCl溶液或0.1mol/LNaOH溶液调整pH，加碱 时速度要慢，同时需不断搅拌，防止局部碱化破坏毒素.
7.2.2将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温，调节pH至2.0~4.0（切勿>4.5）.
将混合物移 至量筒中并稀释至200mL.
7.2.3将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可，必 要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min，或用滤纸过滤.
保留进行小鼠注射用的足量液体.
7.3小鼠试验 7.3.1以感量为0.1g的天平将小鼠称重并记录重量.
每个样品注射3只小鼠.
7.3.2对每只试验小鼠腹腔注射1mL提取液.
注射时若有一滴以上提取液溢出，须将该只小鼠丢弃， 并重新注射一只小鼠.
7.3.3记录注射完毕时间，仔细观察并用秒表记录小鼠停止呼吸时的死亡时间（到小鼠呼出最后一口 气止）.
7.3.4若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样 品的毒力.
7.3.5若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到5min~ 7min的死亡时间；稀释提取液时，要逐滴加人0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液，调节pH至2.0~4.0.
8结果的计算与判断 8.1毒力的计算 8.1.1根据小鼠的死亡时间，在附录B中查出相应的每毫升注射液的鼠单位数M，将存活鼠的死亡时
